Сірковмісна біциклічна сполука

Реферат: UA 116042 C2 (12) UA 116042 C2 [Проблема] Запропонована сполука, корисна як фармацевтична композиція для попередження і/або лікування шизофренії, когнітивного порушення, пов'язаного з шизофренією (CIAS), когнітивного порушення, синдрому ламкої X-хромосоми, розладу аутистичного спектра, еластичності, тривожного розладу, наркоманії, болю, фіброміалгії, хвороби Шарко-Марі-Тута або тому подібного. [Способи рішення] Даними винахідниками проведене дослідження фармацевтичної композиції для попередження і/або лікування шизофренії, когнітивного порушення, пов'язаного з шизофренією (CIAS), когнітивного порушення, синдрому ламкої Х-хромосоми, розладу аутистичного спектра, еластичності, тривожного розладу, наркоманії, болю, фіброміалгії, хвороби Шарко-Марі-Тута або тому подібного, що має дію позитивного алостеричного модулятора (РАМ-дію) GABAB, і встановлено, що сірковмісна біциклічна сполука є РАМ рецептора GABAB, і тим самим завершений даний винахід. Сірковмісна біциклічна сполука за даним винаходом має РАМ-дію GABAB і може бути корисна як засіб для попередження і/або лікування шизофренії, CIAS, когнітивного порушення, синдрому ламкої Х-хромосоми, розладу аутистичного спектра, еластичності, тривожного розладу, наркоманії, болю, фіброміалгії або хвороби Шарко-Марі-Тута. UA 116042 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ [0001] Даний винахід стосується сірковмісної біциклічної сполуки, яка корисна як активний інгредієнт для фармацевтичної композиції, зокрема, фармацевтичної композиції для лікування шизофренії, когнітивного порушення, пов'язаного з шизофренією (CIAS), когнітивного порушення, синдрому ламкої Х-хромосоми, розладу аутистичного спектра, спастичності, тривожного розладу, наркоманії, болю, фіброміалгії, хвороби Шарко-Марі-Тута або тому подібного. РІВЕНЬ ТЕХНІКИ [0002] γ-Аміномасляна кислота (GABA) є типовим гальмовим нейромедіатором, який активує і іонотропний GABAA-, і метаботропний GABAB-рецептор. GABAB-рецептор експресується переважно як в пресинаптичних закінченнях, так і на постсинаптичних ділянках мозку ссавців і регулює гальмову синаптичну передачу, і, таким чином, має широкий діапазон фізіологічних і психопатологичних дій. GABAB-рецептор являє собою рецептор, пов'язаний з G-білком (GPCR), з сімома трансмембранними доменами і структурно належить до класу C. Ці GPCRs класу С мають особливо велику позаклітинну область і функціонують, утворюючи гомо- або гетеродимер(и) (Neuropharmacology, 2011, Jan., vol. 60 (1), р. 82-92). GABAB-рецептор утворює гетеродимери GABAB1 і GABAB2 і виявляє функцію рецептора спільною дією субодиниць. Тобто, тільки GABAB1 має функцією, що дозволяє зв'язування ліганду ортостеричного GABA Bрецептора, і промотує зв'язування і функцію активації G-білка GABAB2. Активований GABAB+ рецептор інгібує аденілатциклазу і контролює відкриття K -каналів (GIRK), кон'югованих з Gбілком, і потенціалзалежних кальцієвих каналів. [0003] З нещодавніх досліджень відомо, що психічні розлади, такі як когнітивне порушення і тому подібні, викликані дисфункцією GABA-опосередкованої нервової системи у пацієнта. (Trends in Neurosciences, 2012, vol. 35 (1), р. 57-67; Molecular Psychiatry, 2003, vol. 8 (8), р. 721737, 715; Frontiers in Psychiatry, 2012, vol. 3, р. 51 і Neuroscience & Biobehavioral Reviews, 2012, Oct., vol. 36 (9), р. 2044-2055). [0004] Баклофен є селективним агоністом GABAB-рецептора і застосовується клінічно. З доклінічних випробувань відомо, що баклофен ослаблює викликане метамфетаміном когнітивне порушення у мишей (European Journal of Pharmacology, 2009, vol. 602 (1), р. 101-104); викликане метамфетаміном і MK-801 порушення преімпульсного інгібування (Neuropsychopharmacology, 2008, Dec., vol. 33 (13), р. 3164-3175) і порушення соціальної поведінки, порушення просторової пам'яті і мозкові хвилі в γ-діапазоні частот у генетично модифікованих мишей з гіпофункцією NMDA-рецептора (Translational Psychiatry, 2012, Jul. 17, vol. 2, р. e142). Повідомляється, що Rбаклофен ефективний у пацієнта з синдромом ламкої Х-хромосоми і при розладі аутистичного спектра (Science Translational Medicine, 2012, Sep 19, vol. 4 (152), р. 152ra127 і Journal of Autism 1 and Development Disorders., 2014, Apr., vol. 44 (4), р. 958-964). Також повідомляється, що FMR , ген, що викликає синдром ламкої Х-хромосоми, впливає значним чином на експресію множинних генів, асоційованих з розладом аутичного спектра (Nature, 2012, Dec., vol. 492, р. 382-386 і Cell, 2011, Jul., vol. 146 (2), р. 247-261). [0005] Баклофен клінічно застосовується для лікування спастичності, контрактури або ригідності, викликаної спіноцеребелярною дегенерацією сітківки, пошкодженням спинного мозку, розсіяним склерозом, аміотрофічним бічним склерозом, центральним паралічем, інсультом, травмою голови або подібним (Neurology, 2004, Oct. 26, vol. 63 (8), р. 1357-1363). Повідомляється також, що баклофен ефективний при тривожному розладі (Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 2004, vol. 310, Р. 952-963); наркоманії, наприклад, пристрасті до наркотиків, таких як нікотин, кокаїн, морфій і тому подібне, або алкоголізмі (Advances in Pharmacology, 2010, vol. 58, р. 373-396; Drug and Alcohol Dependence, 2002, Feb1, vol. 65 (3), р. 209-220 і Synapse, 2003, Oct., vol. 50 (1), р. 1-6); болю, наприклад, невропатичному болю (European Journal of Pain, 2004, Aug., vol. 8(4), р. 377-383) і рефлюкс-езофагіті (Neurogastroenterology and Motility, 2012, Jun, vol. 24 (6), р. 553-559, e253). [0006] Є повідомлення про те, що γ-гідроксимасляна кислота (GHB), агоніст GABAB, також знижує стомлюваність пацієнтів з фіброміалгією і, таким чином ефективний при фіброміалгії (Pain, 2011, vol. 152, р. 1007-1017). Симптом фіброміалгії подібний симптому синдрому хронічної втоми. Очікується, що агоніст GABAB буде ефективним при синдромі хронічної втоми. [0007] Повідомляється, що коли сигнали GABAB активовані, придушується надекспресія генів PMP22, що викликають хворобу Шарко-Марі-Тута типу 1A (European Journal of Neuroscience, 2004, May., vol. 19(10), р. 2641-2649 і Nature Reviews Drug Discovery, 2012, vol. 11, р. 589). [0008] Повідомляється, що рецептор GABAB також присутній в периферичних органах, таких як селезінка, легеня, печінка, кишечник, шлунок, стравохід, сечовий міхур і той подібне 1 UA 116042 C2 5 10 15 20 25 (Neuroscience, 2000, vol. 100 (1), р. 155-170 і The Journal of Biological Chemistry, 2000, Oct. 13, vol. 275 (41), р. 32174-32181). Тому очікується, що ліганд GABAB-рецептора буде застосовний для лікування захворювань периферичних органів. [0009] Таким чином, передбачається, що сполука, яка активує GABA B-рецептор, корисна для попередження або лікування шизофренії, CIAS, когнітивного порушення, синдрому ламкої Ххромосоми, розладу аутичного спектра, спастичності, тривожного розладу, наркоманії, болю, фіброміалгії, хвороби Шарко-Марі-Тута або тому подібного. [0010] З іншого боку, баклофен має вузьке терапевтичне вікно внаслідок небажаних побічних ефектів, таких як седативний ефект, м'язова слабкість і тому подібних, і з цієї причини його застосування обмежене. Зниження моторної координації, зниження температури тіла і тому подібне також складає побічні ефекти терапії баклофеном. [0011] Існує велика кількість повідомлень про позитивний алостеричний модулятор (PAM) (Molecular Pharmacology, 2001, vol. 60 (5), р. 963-971; Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 2004, Sep., vol. 310 (3), р. 952-963 і Psychopharmacology (Berl), 2011, May., vol. 215(1), р. 117-128). PAM рецептора GABAB зв'язується з рецептором по ділянці, відмінній від ділянки зв'язування ендогенного ліганду, тим самим поліпшуючи дію рецептора. PAM рецептора GABAB сам по собі не має агоністичної активності, але підвищує спорідненість до рецептору ендогенного GABA, і, таким чином, має дію, що підвищує потенціал і ефективність GABA Bрецептора. Вважається, що завдяки цим властивостям PAM GABA B-рецептора не має побічних ефектів агоніста GABAB (наприклад, побічних дій баклофену, як описано вище) і надає корисні терапевтичні дії. [0012] Таким чином, PAM GABAB-рецептора має незначні побічні ефекти і, як очікується, буде корисний для попередження або лікування шизофренії, CIAS, когнітивного порушення, синдрому ламкої Х-хромосоми, розладу аутичного спектра, спастичності, тривожного розладу, наркоманії, болю, фіброміалгії, хвороби Шарко-Марі-Тута або тому подібного. [0013] Патентний документ 1 описує сполуку наступної загальної формули, яка включає сполуку, представлену Пр. 60, як лікарський засіб для лікування шизофренії. 1 30 35 1 (У формулі визначення R включає багато груп. Як одна з цих груп, R означає n циклоалкільну групу, яка може бути заміщеною, або тому подібне. Визначення A включає n багато груп. Як одна з цих груп, A означає алкільну групу, яка може бути заміщеною, або тому подібне. Що стосується інших позначень в формулі, дивись патентний документ 1). 1 [0014] Патентний документ 2 розкриває, що інгібітор mGluR , представлений наступною загальною формулою, корисний при лікуванні хвороби Паркінсона, мігрені або тому подібному. 2 2a 2b (У формулі R означає -N(R )R , -O-R формулі, дивись патентний документ 2). 2a 2a або -S-R . Що стосується інших позначень в 2 UA 116042 C2 [0015] Патентний документ 3 розкриває, що антагоніст 5-HT, представлений наступною загальною формулою, корисний як лікарський засіб для лікування нейропатологічного захворювання. 5 10 15 20 25 30 (Що стосується позначень в формулі, дивись патентний документ 3). РІВЕНЬ ТЕХНІКИ Патентний документ [0016] [Патентний документ 1] Міжнародна публікація WO 2006/030031. [Патентний документ 2] Міжнародна публікація WO 02/062803. [Патентний документ 3] Міжнародна публікація WO 2004/089312. РОЗКРИТТЯ ВИНАХОДУ Проблеми, що вирішуються винаходом [0017] Даний винахід стосується сірковмісної біциклічної сполуки, яка корисна як активний інгредієнт фармацевтичної композиції, зокрема, фармацевтичної композиції для лікування шизофренії, CIAS, когнітивного порушення, синдрому ламкої Х-хромосоми, розладу аутичного спектра, спастичності, тривожного розладу, наркоманії, болю, фіброміалгії, хвороби ШаркоМарі-Тута або тому подібного. Способи розв'язання проблем [0018] Дані заявники провели широкі дослідження PAM рецептора GABA B, і в результаті встановили, що сірковмісна біциклічна сполука є PANM рецептора GABAB, тим самим завершивши даний винахід. Таким чином, даний винахід стосується сполуки формули (I) або її солі, а також фармацевтичної композиції, що включає сполуку формули (I) або її сіль і наповнювач. (в формулі X означає CH, 1 R означає нижчий алкіл, 2 R означає нижчий алкіл, 1 2 де R і R , разом з атомами вуглецю, до яких вони приєднані, можуть утворювати циклоалкан, 3 R означає -H, 4 R означає -H, 3 UA 116042 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 цикл А означає циклогексановий цикл, Y A B R означає -NR R , A B R і R , разом з атомом азоту, до якого вони приєднані, утворюють циклічний аміно, який може бути заміщеним, де циклічний аміно означає групу, представлену наступною формулою (III): Y означає NH, О, S, S(=О)2 або CH2 і L R означає нижчий алкіл). При цьому якщо не указано інше, коли позначення деякої хімічної формули в даному описі присутні також в іншій хімічній формулі, той же символ має те ж саме значення. [0019] Далі, даний винахід стосується: (1) фармацевтичної композиції для попередження або лікування шизофренії, CIAS, когнітивного порушення, синдрому ламкої Х-хромосоми, розладу аутичного спектра, спастичності, тривожного розладу, наркоманії, болю, фіброміалгії або хвороби Шарко-МаріТута, що включає сполуку формули (I) або її сіль; де фармацевтична композиція містить засіб для лікування шизофренії, CIAS, когнітивного порушення, синдрому ламкої Х-хромосоми, розладу аутичного спектра, спастичності, тривожного розладу, наркоманії, болю, фіброміалгії або хвороби Шарко-Марі-Тута, що містить сполуку формули (I) або її сіль; (2) застосування сполуки формули (I) або її солі при отриманні фармацевтичної композиції для попередження або лікування шизофренії, CIAS, когнітивного порушення, синдрому ламкої Х-хромосоми, розладу аутичного спектра, спастичності, тривожного розладу, наркоманії, болю, фіброміалгії або хвороби Шарко-Марі-Тута; (3) застосування сполуки формули (I) або її солі для попередження або лікування шизофренії, CIAS, когнітивного порушення, синдрому ламкої Х-хромосоми, розладу аутичного спектра, спастичності, тривожного розладу, наркоманії, болю, фіброміалгії або хвороби ШаркоМарі-Тута; (4) сполуки формули (I) або її солі для попередження або лікування шизофренії, CIAS, когнітивного порушення, синдрому ламкої Х-хромосоми, розладу аутичного спектра, спастичності, тривожного розладу, наркоманії, болю, фіброміалгії або хвороби Шарко-МаріТута; (5) способу попередження або лікування шизофренії, CIAS, когнітивного порушення, синдрому ламкої Х-хромосоми, розладу аутичного спектра, спастичності, тривожного розладу, наркоманії, болю, фіброміалгії або хвороби Шарко-Марі-Тута, що включає в себе введення суб'єкту ефективної кількості сполуки формули (I) або її солі. При цьому термін "суб'єкт" означає людину або іншу тварину, яка потребує попередження або лікування, і згідно з конкретним варіантом здійснення, людину, яка потребує попередження або лікування. ЕФЕКТИ ВИНАХОДУ [0020] Сполука формули (I) або її сіль має дію PAM рецептора GABA B і може застосовуватися як засіб для попередження і/або лікування шизофренії, CIAS, когнітивного порушення, синдрому ламкої X-хромосоми, розладу аутичного спектра, спастичності, тривожного розладу, наркоманії, болю, фіброміалгії, хвороби Шарко-Марі-Тута або тому подібного. ВАРІАНТИ ЗДІЙСНЕННЯ ВИНАХОДУ [0021] Далі даний винахід описаний детально. "Нижчий алкіл" означає лінійний або розгалужений алкіл з 1-6 атомами вуглецю (тут далі просто називається C1-6), наприклад, метил, етил, н-пропіл, ізопропіл, н-бутил, ізобутил, вторбутил, трет-бутил, н-пентил, н-гексил або тому подібне, в іншому варіанті здійснення, C1-4 алкіл і в ще одному варіанті здійснення, метил. 4 UA 116042 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 [0022] "Нижчий алкілен" означає лінійний або розгалужений C 1-6-алкілен, наприклад, метилен, етилен, триметилен, тетраметилен, пентаметилен, гексаметилен, метилметилен, етилетилен, 1,2-диметилетилен, 1,1,2,2-тетраметилетилен або тому подібне, в іншому варіанті здійснення, C1-4-алкілен і в подальшому варіанті здійснення, етилен. [0023] "Галоген-нижчий алкіл" означає C1-6-алкіл, заміщений одним або більше атомами галогену, в іншому варіанті здійснення, нижчий алкіл, заміщений 1-5 атомами галогену, в подальшому варіанті здійснення, нижчий алкіл, заміщений 1-3атомами галогену, і в ще одному варіанті здійснення, -CF3. [0024] "галоген" означає F, Cl, Br або I. [0025] "Циклоалкан" означає C3-8- насичений вуглеводневий цикл, наприклад, циклопропан, циклобутан, циклопентан, циклогексан, циклогептан або циклооктан, в іншому варіанті здійснення, C5-6-циклоалкан, в подальшому варіанті здійснення, циклогексан і в ще одному варіанті здійснення, циклопропан. [0026] "Циклоалкіл" означає C3-8- насичену, вуглеводневу, циклічну групу, наприклад, циклопропіл, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил або циклооктил, в іншому варіанті здійснення, C5-6-циклоалкіл, в подальшому варіанті здійснення, циклогексил, і в ще одному варіанті здійснення, циклопропіл. [0027] У даному описі вираз "який може бути заміщеним" означає "який є незаміщеним" або "який заміщений 1-5 замісниками" і в іншому варіанті здійснення - "який є незаміщеним" або "який заміщений 1-3 замісниками". Крім того, якщо він має множину замісників, замісники можуть бути однаковими або відмінними один від одного. A B [0028] У даному описі, що стосується виразу "R і R , разом з атомом азоту, до якого вони приєднані, утворюють циклічний аміно, який може бути заміщеним", приклади замісника, який може бути використаний для заміщення в циклічному аміно, включають групи, вибирані з наступної групи Z. Група Z: (1) =О, (2) -OH, (3) - О-нижчий алкіл, (4) галоген, (5) - CN, (6) нижчий алкіл, (7) галоген-нижчий алкіл, (8) нижчий алкілен-ОН, (9) нижчий алкілен-О-нижчий алкіл, (10) -С(=О)-нижчий алкіл, (11) -С(=О)-нижчий алкілен-ОН, (12) -С(=О)-нижчий алкілен-CN і (13) циклоалкіл. [0029] У окремому аспекті приклади "групи, яка вибирається з групи Z", включають групи, вибирані з наступної групи Z1. Група Z1: (1) -OH, (2) нижчий алкіл і (3) -С(=О)-нижчий алкілен-ОН. [0030] Деякі аспекти даного винаходу приведені нижче. [1] Сполука, представлена формулою (I) або її сіль, де Y A B R означає -NR R , A B R і R , разом з атомом азоту, до якого вони приєднані, утворюють циклічний аміно, який 0 може бути заміщений R , де циклічний аміно означає групу, представлену наступною формулою (III): ,і 0 R означає групу, вибирану з наступної групи Z: Група Z: 5 UA 116042 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 (1) =О, (2) -OH, (3) -О-нижчий алкіл, (4) галоген, (5) -CN, (6) нижчий алкіл, (7) галоген-нижчий алкіл, (8) нижчий алкілен-ОН, (9) нижчий алкілен-О-нижчий алкіл, (10) -С(=О)-нижчий алкіл, (11) -С(=О)-нижчий алкілен-ОН, (12) -С(=О)-нижчий алкілен-CN і (13) циклоалкіл. [2] Сполука або її сіль за [1], де група, вибирана з групи Z, означає групу, вибирану з: Групи Z1: (1) -OH, (2) нижчий алкіл і (3) -С(=О)-нижчий алкілен-ОН. [3] Сполука формули (I) або її сіль, де Y означає О, S або S(=О)2. [4] Сполука формули (I) або її сіль, де RL означає CH 3. [5] Сполука або її сіль, що являє собою комбінацію двох або більше груп, описаних у варіантах здійснення [1]-[4]. [0031] Приклади сполучень за даним винаходом приведені нижче. [6] Сполука формули (I) або її сіль, де X означає CH, цикл А означає циклогексановий цикл, 1 2 3 4 Y R означає нижчий алкіл, R означає нижчий алкіл, R означає -H, R означає -H, R представлений наступною формулою (III), і може бути заміщеним: Y означає О, S або S(=О)2 і RL означає нижчий алкіл. [0032] Приклади конкретних сполук, що входять в даний винахід, включають наступні сполуки або їх солі: 6-(4,4-диметилциклогексил)-4-[(1,1-діоксо-1(6-тіоморфолін-4-іл)метил]-2-метилтієно[2,3d]піримідин, транс-1-{[6-(4,4-диметилциклогексил)-2-метилтієно[2,3-d]піримідин-4-іл]метил}піперидин-3,4діол, 1-{[6-(4,4-диметилциклогексил)-2-метилтієно[2,3-d]піримідин-4-іл]метил}піперидин-4-ол, 6-(4,4-диметилциклогексил)-2-метил-4-(тіоморфолін-4-ілметил)тієно[2,3-d]піримідин, 6-(4,4-диметилциклогексил)-4-[(3,3-диметилморфолін-4-іл)метил]-2-метилтієно[2,3d]піримідин або 1-{[6-(4,4-диметилциклогексил)-2-метилтієно[2,3-d]піримідин-4-іл]метил}-2,2диметилпіперидин-4-ол. 6 Група "1,1-діоксо-1λ -тіоморфолін-4-іл" означає ту ж саму групу, що і "1,1діоксидотіоморфолін-4-іл". [0033] У даному описі "PAM" означає сполуку, яка зв'язується з рецептором по ділянці, відмінній від ділянки зв'язування ендогенного ліганда, тим самим поліпшуючи дію рецептора. Сполука саме по собі не має агоністичної активності, але має дію, що підвищує потенціал і ефективність рецептора. У даному описі "дія PAM" означає дію, яку має PAM, як описано вище. Наприклад, в прикладі випробування 1 PAM означає сполуку, яка зміщує ліворуч або зміщує вгору реакційну криву доза GABA-відповідь, де горизонтальна вісь - доза, а вертикальна вісь - відповідь. Коли випробуваний лікарський засіб має "потенціал", сполука зміщує ліворуч криву залежності доза GABA-відповідь, тоді як якщо випробуваний лікарський засіб має "ефективність", сполука зміщує вгору криву доза GABA-відповідь. По даному опису симптоми захворювання не повністю незалежні і можуть накладатися один на один. Наприклад, симптоми шизофренії, CIAS і когнітивного порушення можуть накладатися один на один. 6 UA 116042 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Далі, в даному описі назва захворювання основана на відповідності "ICD10", що є міжнародною класифікацією хвороб ВОЗ (Всесвітньої організації охорони здоров'я), 4ої редакції (DSM-4) і 5ої редакції (DSM-5) Статистичного посібника по психічній діагностиці, Американській асоціації психіатрів (АПА) і/або рекомендаціях Посібника Японського товариства неврології, або тому подібному. [0034] Сполука формули (I) може існувати в формі таутомерів або геометричних ізомерів залежно від виду замісників. У даному описі сполука формули (I) може бути охарактеризована не тільки однією формою ізомеру, при цьому даний винахід включає такий ізомер, ізольовані форми ізомерів або їх суміш. Крім того, в деяких випадках сполука формули (I) може мати асиметричні атоми вуглецю або аксіальну асиметрію і, відповідно, може існувати в формі оптичних ізомерів. Даний винахід включає ізольовану форму оптичних ізомерів сполуки формули (I) або їх суміш. [0035] До того ж, даний винахід включає також фармацевтично прийнятні проліки сполуки, представлені формулою (I). Фармацевтично прийнятні проліки означає сполуку, яка містить групу, яка може бути перетворена в аміногрупу, гідроксильну групу, карбоксильну групу або тому подібне шляхом сольволізу або в фізіологічних умовах. Приклади групи, яка утворює проліки, включають групи, описані в Progress in Medicine, 1985, р. 2157-2161 і "Pharmaceutical Research and Development" (Hirokawa Publishing Company) 1990, Vol. 7, Drug Design, р. 163-198. [0036] Крім того, сіль сполуки формули (I) являє собою фармацевтично прийнятну сіль сполуки формули (I) і може утворювати кислотно-адитивну сіль залежно від виду замісників. Конкретні приклади таких солей включають кислотно-адитивні солі з неорганічними кислотами, такими як хлористоводнева кислота, бромистоводнева кислота, йодистоводнева кислота, сірчана кислота, азотна кислота і фосфорна кислота; і кислотно-адитивні солі з органічними кислотами, такими як мурашина кислота, оцтова кислота, пропіонова кислота, щавлева кислота, малонова кислота, янтарна кислота, фумарова кислота, малеїнова кислота, молочна кислота, яблучна кислота, мигдалева кислота, винна кислота, дибензоїлвинна кислота, дитолілвинна кислота, лимонна кислота, метансульфонова кислота, етансульфонова кислота, бензолсульфонова кислота, п-толуолсульфонова кислота, аспарагінова кислота і глутамінова кислота. [0037] Даний винахід включає також різні гідрати або сольвати і поліморфні кристалічні субстанції сполуки формули (I) і її солі. Додатково даний винахід включає також сполуки, мічені різними і нерадіоактивними ізотопами. [0038] (Способи отримання) Сполука формули (I) і її сіль можуть бути отримані з використанням характеристик, зумовлених основною структурою або типом замісника і із застосуванням різних відомих способів синтезу. Тут, залежно від типу функціональних груп, в деяких випадку ефективно, з точки зору методик отримання, заміняти функціональну групу відповідною захисною групою (групою, яка зможе бути легко перетворена в функціональну групу) на стадії від вихідних речовин до проміжних сполук. Приклади такої захисної групи включають захисні групи, описані в P. G. M. Wuts and T. W. Greene, "Greene's Protective Groups in Organic Synthesis (4th edition), 2006" і тому подібному, і одна з них може бути відповідно вибрана і використана по мірі необхідності залежно від умов взаємодії. При такому способі необхідна сполука може бути отримана введенням захисної групи і потім видаленням захисної групи по мірі необхідності. Крім того, проліки сполуки формули (I) можуть бути отримані введенням специфічної групи або подальшим здійсненням взаємодії з використанням отриманої сполуки формули (I) на стадії від вихідної речовини до проміжної сполуки, так само, як у разі вищезазначеної захисної групи. Взаємодія може бути здійснена з використанням методів, відомих фахівцеві в даній галузі, таких як звичайна етерифікація, амідування, дегідратація і тому подібне. Нижче описані типові способи отримання сполуки формули (I). Кожний зі способів отримання може також бути виконаний згідно з посилальним матеріалом, прикладеним в даному описі. При цьому способи отримання за даним винаходом не обмежуються приведеними нижче прикладами. [0039] У деяких випадках в даному описі, прикладах, препаративних прикладах і таблицях, приведених нижче, можуть застосовуватися наступні скорочення. PAM=позитивний алостеричний модулятор, PAM-дія=позитивна алостерична модулююча дія, CIAS = когнітивне порушення, пов'язане з шизофренією. AcOH=оцтова кислота, BINAP=2,2'-біс(дифенілфосфіно)-1,1'-бінафтил, brine=насичений фізіологічний розчин, CBB=кумасі діамантовий блакитний, CHAPS=3-[(3хлорамідопропіл)диметиламоніо]пропансульфонат, DABCO=1,4-діазабіцикло[2.2.2]октан, DCE=1,2-дихлоретан, DCM = дихлорметан, CDI=1,1'-карбонілдіімідазол, DMEM=модифіковане 7 UA 116042 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 по способу Дульбекко середовище Ігла, DIBAL=діізобутилалюміній, DIBOC=ди-третбутилбикарбонат, DIPEA=N, N-діізопропілетиламін, DME=диметоксіетан, ДМФА=N,Nдиметилформамід, ДМСО=диметилсульфоксид, DPPA=дифенілфосфорилазид, DPPF=1,1'біс(дифенілфосфіно)фероцен, EGTA=простий гліколевий ефір діамінтетраоцтової кислоти, Et2O=простий діетиловий ефір, EtOAc=етилацетат, EtOH=етанол, GABA=γ-аміномасляна кислота, HATU=гексафторфосфат 1-[біс(диметиламіно)метилен]-1H-1,2,3-триазоло[4,5b]піридин-1-іум-3-оксиду, HCl/EtOAc=розчин соляна кислота/EtOAc, HCl/діоксан = розчин соляна кислота/діоксан, HBSS = збалансований сольовий розчин Хенкса, Hepes=4-(2-гідроксіетил)-1піперазинетансульфонова кислота, HOBt=1-гідроксибензотриазол, IPE = простий діізопропілетиловий ефір, KOBut=трет-бутилат калію, LAH=алюмогідрид літію, MeCN=ацетонітрил, MeOH=метанол, MgSO4=безводний сульфат магнію, Ms=метансульфоніл, MsCl=метансульфонілхлорид, NaOEt=метилат натрію, Na2SO4=безводний сульфат натрію, t NaBH(OAc)3=триацетоксиборгідрид натрію, NaOBu =трет-бутилат натрію, NBS=Nбромсукцинімід, NCS=N-хлорсукцинімід, n-BuLi=н-бутиллітій, NMO=N-метилморфолін, NMP=Nметил-2-піролідон, ORF =відкрита рамка зчитування, Pd(OAc)2=ацетат паладію(II), Pd/С=паладій на вугіллі, Pd2dba3=тріс(дибензиліденацетон)дипаладій (0), Pd(PPh3)4=тетракіс(трифенілфосфін)паладій(0), Red-Al=біс-(2-метоксіетокси)алюмогідрид натрію, TEA=триетиламін, ТГФ=тетрагідрофуран, TTIP=ізопропілат титану(IV), WSC=1-етил-3(3-диметиламінопропіл)карбодіімід, колонка з силікагелем = колонкова хроматографія на силікагелі, колонка з основним силікагелем = колонкова хроматографія на основному силікагелі, надкритична хроматографія = надкритична хроматографія, насичений водний бікарбонат натрію = насичений водний розчин NaHCO3. [0040] в деяких випадках в структурних формулах можуть бути використані наступні скорочення. Ac=ацетил, Bn=бензил, Boc=трет-бутоксикарбоніл, Et=етил, Me=метил, Ms=SO 2CH3, t t Ph=феніл, Bu або Bu =трет-бутил. [0041] Крім того, для зручності, концентрація в моль/л виражається як M. Наприклад, 1 М водний розчин NaOH означає 1 моль/л водний розчин NaOH. [0042] (Спосіб отримання 1) (У формулі Lv означає відхідну групу. Те ж саме позначення використовується надалі). Сполука (I-1) за даним винаходом може бути отримана із сполуки (1) і сполуки (1a). Відхідна група являє собою, наприклад, галоген, OMs групу або тому подібне. Ця взаємодія може бути здійснена, при використанні сполуки (1) і сполуки (1a) в еквівалентних кількостях або будь-якої з них в надмірній кількості, шляхом перемішування їх суміші при будь-якому температурному режимі, від охолоджування до нагрівання, переважно від 0 °C до 80 °C, звичайно протягом 0,1 години - 5 днів, в розчиннику, який інертний до взаємодії, або без розчинника. Розчинник не має конкретних обмежень доти, поки він не заважає взаємодії, при цьому приклади його включають ароматичні вуглеводні, такі як толуол, ксилол і тому подібне, прості ефіри, такі як Et2O, ТГФ, DME, діоксан і тому подібне, галогеновані вуглеводні, такі як DCM, DCE, хлороформ і тому подібне, ДМФА, ДМСО, EtOAc, MeCN і змішаний з них розчинник. У деяких випадках може бути доцільно для гладкого протікання реакції здійснювати взаємодію в присутності органічної основи, такої як TEA, DIPEA і NMO, або неорганічної основи, такої як K2CO3, Na2CO3 і KOH. [Документи] S. R. Sandler and W. Karo, "Organic Functional Group Preparations", 2nd edition, Vol. 1, Academic Press Inc., 1991. "Jikken Kagaku Koza (Courses in Experimental Chemistry) (5th edition)", Vol. 14 (2005), edited by The Chemical Society of Japan, Maruzen. [0043] (Спосіб отримання 2) 8 UA 116042 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 (У формулі подвійні зв'язки, що перехрещуються, вказують цис- або транс-конфігурацію). Сполуку (I-2) за даним винаходом отримують зі сполуки (2) і сполуки (1a). При цій взаємодії сполуку (2) і сполуку (1a) використовують в еквівалентних кількостях або будь-яку з них в надмірній кількості, і їх суміш перемішують при будь-якому температурному режимі, від -30 °C до нагрівання до температури кипіння зі зворотним холодильником, переважно від 0 °C до кімнатної температури, як правило, протягом 0,1 години - 5 днів, в розчиннику, який інертний до взаємодії, в присутності відновлювального агента. Розчинник не має конкретних обмежень доти, поки він не заважає взаємодії, при цьому приклади його включають спирти, такі як MeOH і тому подібне, прості ефіри і змішаний з них розчинник. Як відновлювальний агент може бути використаний NaBH(OAc) 3, NaBH3CN, NaBH4 або тому подібне. У деяких випадках може бути доцільно для гладкого протікання реакції додавати дегідратуючий засіб, такий як молекулярні сита, AcOH, хлористоводневу кислоту, TTIPкомплекс або тому подібне. В результаті конденсації сполуки (2) із сполукою (1a) утворюється імін, який може бути виділений в деяких випадках у вигляді стійкої проміжної сполуки. Цей проміжний імін може бути підданий відновленню з отриманням сполуки (I-2). Крім того, замість використання відновлювального агента може бути використаний каталізатор відновлення (наприклад, Pd/С і нікель Ренея) при тиску від нормального до 50 атм (0,5 МПа) в атмосфері водню, в присутності або відсутності кислоти, такої як AcOH і хлористоводнева кислота, в розчиннику, такому як MeOH, EtOH і EtOAc. Ця взаємодія може бути виконана при будь-якому температурному режимі, від охолоджування до нагрівання. [Документи] "Comprehensive Organic Functional Group Transformations II", A. R. Katritzky and R. J. K. Taylor, Vol. 2, Elsevier Pergamon, 2005. "Courses in Experimental Chemistry (5th edition)", edited by The Chemical Society of Japan, Vol. 14 (2005) (Maruzen) [0044] (Спосіб отримання 3) Сполука (I-3) за даним винаходом може бути отримана зі сполуки (3) і сполуки (1a). При цій взаємодії сполуку (3) і сполуку (1a) використовують в еквівалентних кількостях або будь-яку з них в надмірній кількості, і їх суміш перемішують при будь-якому температурному режимі, від охолоджування до нагрівання, переважно від -20 °C до 60 °C, як правило, протягом 0,1 години - 5 днів, в розчиннику, який інертний до взаємодії, в присутності конденсуючого агента. Розчинник не має конкретних обмежень доти, поки він не заважає взаємодії, при цьому приклади його включають ароматичні вуглеводні, галогеновані вуглеводні, такі як DCM і тому подібне, прості ефіри, ДМФА, ДМСО, EtOAc, CH 3CN або воду і змішаний з них розчинник. Конденсуючим агентом є, наприклад, WSC, CDI, DPPA, HATU, оксихлорид фосфору або тому подібне. У деяких випадках гладке протікання реакції може бути забезпечене за допомогою добавки, такої як HOBt або тому подібної. У окремих випадках гладке протікання реакції може 9 UA 116042 C2 5 10 15 20 25 30 35 бути забезпечене за допомогою органічної основи, такої як піридин, TEA, DIPEA, NMO або тому подібне, або неорганічної основи, такої як K2CO3, Na2CO3, KOH або тому подібного. Крім того, сполука (I-3) за даним винаходом може бути також отримана з реакційноздатного похідного карбонової кислоти (3) і сполуки (1a). Приклади реакційноздатного похідного включають галоїдангідриди кислот, отримані взаємодією галогенуючого агента, такого як оксихлорид фосфору, тіонілхлорид і тому подібне; змішані ангідриди кислот, отримані взаємодією з ізобутилхлороформіатом або тому подібним; і активні складні ефіри, отримані конденсацією з HOBt або тому подібним. При взаємодії реакційноздатного похідного зі сполукою (1a) їх суміш можна перемішувати при будь-якому температурному режимі, від охолоджування до нагрівання, переважно від -20 °C до 60 °C, як правило, протягом 0,1 години - 5 днів, з органічною основою, такою як піридин, TEA, DIPEA, NMO і тому подібне, в розчиннику, який інертний до взаємодії. Розчинник не має конкретних обмежень доти, поки він не заважає взаємодії, при цьому можуть бути використані галогеновані вуглеводні, ароматичні вуглеводні, прості ефіри або тому подібне. Крім того, органічну основу можна використовувати в комбінації з розчинником. [Документи] S. R. Sandler and W. Karo, "Organic Functional Group Preparations", 2nd edition, Vol. 1, Academic Press Inc., 1991. "Jikken Kagaku Koza (Courses in Experimental Chemistry) (5th edition)", Vol. 16 (2005), edited by The Chemical Society of Japan (Maruzen). [0045] (Спосіб отримання 4) Сполука (I-4) за даним винаходом може бути отримана по реакції гідрогенізації сполуки (4). При цій взаємодії сполуку (4) перемішують при будь-якому температурному режимі, від охолоджування до нагрівання, переважно при кімнатній температурі, як правило, протягом 1 години - 5 днів, з металевим каталізатором, в розчиннику, який інертний до взаємодії, в атмосфері водню. Розчинник не має конкретних обмежень доти, поки він не заважає взаємодії, при цьому приклади його включають спирти, прості ефіри і тому подібне. Металевий каталізатор являє собою, наприклад, паладієвий каталізатор, такий як Pd(OH)2 і тому подібне. Замість газоподібного водню мурашину кислоту або форміат амонію в еквівалентних кількостях або в надмірній кількості можна використовувати як джерело водню відносно сполуки (4). [Документи] M. Hudlicky, "Reductions in Organic Chemistry, 2nd edition (ACS Monograph: 188), "ACS, 1996. "Jikken Kagaku Koza" (Courses in Experimental Chemistry) (5th edition), edited by The Chemical Society of Japan, Vol. 19 (2005) (Maruzen) [0046] (Синтез вихідних матеріалів 1) 10 UA 116042 C2 5 10 15 20 25 30 35 (У формулі Prg означає захисну групу. Те ж саме використовується надалі). [0047] Вихідна сполука (1) може бути отримана зі сполуки (6). (i) Вихідна сполука (1), в якій Lv означає галоген, може бути отримана галогенуванням сполуки (6). Ця взаємодія може бути виконана при будь-якому температурному режимі, від нагрівання до нагрівання до температури кипіння зі зворотним холодильником, з галогенуючим агентом, таким як SO2Cl2, оксихлорид фосфору або тому подібне, і ДМФА. Розчинник не має конкретних обмежень доти, поки він не заважає взаємодії, при цьому може бути використаний толуол або тому подібне. Як галогенуючий агент може бути використаний PBr3, NBS або тому подібне. (ii) Вихідна сполука (1), в якій Lv означає OMs групу, може бути отримана додаванням органічної основи і MsCl до сполуки (6) при будь-якому температурному режимі, від 0 °C до кімнатної температури, в розчиннику, який інертний до взаємодії, в атмосфері водню. Розчинник не має конкретних обмежень доти, поки він не заважає взаємодії, при цьому може бути використаний DCM або тому подібне. [0048] Сполука (6) може бути отримана взаємодією сполуки (5). При цій взаємодії сполуку (5) обробляють відновлювальним агентом в еквівалентній кількості або в надмірній кількості при будь-якому температурному режимі, від охолоджування до нагрівання, переважно від -20 °C до 80 °C, як правило, протягом 0,1 години - 3 днів, в розчиннику, який інертний до взаємодії. Розчинник не має конкретних обмежень доти, поки він не заважає взаємодії, при цьому приклади його включають прості ефіри, ароматичні вуглеводні, спирти і змішаний з них розчинник. Як відновлювальний агент використовують NaBH 4, боран (BH3) або відновлювальний агент по нижченаведених документах. Коли як відновлювальний агент використовують, наприклад, NaBH4, хлорид кальцію в деяких випадках може забезпечити гладке протікання реакції. [Документи] M. Hudlicky, "Reductions in Organic Chemistry, 2nd edition (ACS Monograph: 188), "ACS, 1996. R. C. Larock, "Comprehensive Organic Transformations", 2nd edition, VCH Publishers, Inc., 1999. T. J. Donohoe, "Oxidation and Reduction in Organic Synthesis (Oxford Chemistry Primers 6)", Oxford Science Publications, 2000. "Jikken Kagaku Koza" (Courses in Experimental Chemistry) (5th edition), edited by The Chemical Society of Japan, Vol. 14 (2005) (Maruzen). [0049] Вихідна сполука (3) може бути отримана зняттям захисту сполуки (5). Ця взаємодія може бути виконана згідно з "Protective Groups in Organic Synthesis", Greene and Wuts, 3rd edition, John Wiley & Sons Inc, 1999. [0050] (Синтез вихідних матеріалів 2) 11 UA 116042 C2 AL 5 10 15 20 25 AL (У формулі Hal означає галоген, R означає нижчий алкіл і -OR означає нижчий алкілокси. Те ж саме позначення використовується надалі). Сполука (2) може бути отримана зняттям захисту сполуки (8). Ця взаємодія може бути виконана згідно з "Protective Groups in Organic Synthesis", Greene and Wuts, 3rd edition, John Wiley & Sons Inc, 1999. Сполука (8) може бути отримана зі сполуки (7) і пінаколінового ефіру нижчої алкілоксіетенборонової кислоти (7a). Ця реакція є так званим поєднанням Сузукі між сполукою (7) і сполукою боронової кислоти. Ця взаємодія може бути здійснена додаванням паладію, фосфінового ліганду і основи металу як реагенту при будь-якому температурному режимі, від кімнатної температури до нагрівання до температури кипіння зі зворотним холодильником. Розчинник не має конкретних обмежень доти, поки він не заважає взаємодії, при цьому може застосовуватися розчинник, який є інертним до взаємодії, таким як ароматичні вуглеводні, прості ефіри, галогеновані вуглеводні, апротонні розчинники і AcOH, або розчинник може не використовуватися. Як паладій, наприклад, може бути використаний Pd(OAc)2, Pd2dba3 або тому t подібне. Як фосфіновий ліганд, наприклад, може бути використаний BINAP, DPPF, Р(Bu )3 або t тому подібне. Як основа металу може бути використаний K 2CO3, Cs2CO3, NaOBu або тому подібне. [0051] (Синтез вихідних матеріалів 3) Вихідна сполука (6) може бути отримана гідролізом сполуки (9). Сполука (9) може бути отримана зі сполуки (7) і сполуки (7b). Ця реакція є сполученням Негіши, по якому органічну сполуку цинку і органічний галогенід піддають конденсації з паладієвим або нікелевим каталізатором з отриманням продукту вуглець-вуглецевого зв'язування. Розчинник не має конкретних обмежень доти, поки він не заважає взаємодії, при цьому можна використовувати ТГФ або тому подібне. Як каталізатор, наприклад, може бути використаний Pd(PPh3)4. Звичайно взаємодію можна здійснювати при кімнатній температурі. [Документи] Negishi, E. Acc. Хім. Res. 1982, vol. 15, р. 340-348, 12 UA 116042 C2 5 10 15 20 25 "Metal-Catalyzed Cross-Coupling Reactions", edited by А. de Meijere and F. Diederich, 2nd edition, VCH Publishers Inc., 2004, "Jikken Kagaku Koza" (Courses in Experimental Chemistry) (5th edition), edited by The Chemical Society of Japan, Vol. 13 (2005) (Maruzen). Organic Letters, 2004, р. 3225, Synlett, 2008, р. 543. [0052] (Синтез вихідних матеріалів 4) (Сполука (10) присутня у вигляді таутомера як кето-енол, згідно з вказаним вище. У даному описі сполука (10) і сполука за препаративним прикладом Пр. 23, і так далі, як описано нижче, ради зручності вказані або в кето-формі, або в енольній формі). Сполука (7) може бути отримана галогенуванням сполуки (10). Ця взаємодія може бути здійснена тим же способом, що і спосіб, описаний вище в синтезі вихідних матеріалів 1. [0053] (Синтез вихідних матеріалів 5) Вихідна сполука (5) може бути отримана зі сполуки (11). Prg означає нижчий алкіл, такий як Me і Et. Ця взаємодія може бути виконана з використанням спирту (Prg-OH) як розчинника і реагенту, перемішуванням їх суміші зі сполукою (11) і гідридом водню, таким як HCl/діоксан і HCl/EtOAc, при будь-якому температурному режимі від кімнатної температури до нагрівання протягом декількох годин - всієї ночі. Сполука (11) може бути отримана ціануванням сполуки (7). Ця взаємодія може бути виконана з джерелом CN, таким як NaCN, KCN, Zn (CN)2 або тому подібне і CH3SO2Na або тому подібне, при будь-якому температурному режимі від 50 °C до 80 °C, протягом декількох годин всієї ночі, при перемішуванні. Розчинник не має конкретних обмежень доти, поки він не заважає взаємодії, при цьому можна використовувати ДМФА або тому подібне. [0054] (Синтез вихідних матеріалів 6) 13 UA 116042 C2 5 10 15 20 25 Вихідна сполука (10-1) може бути отримана зі сполуки (14). Ця взаємодія може бути здійснена нагріванням і перемішуванням сполуки (14) з водним розчином неорганічної основи, таким як водний розчин NaOH або тому подібне, в розчиннику, який інертний до взаємодії. Розчинник не має конкретних обмежень доти, поки він не заважає взаємодії, при цьому можна використовувати спирти, такі як EtOH і тому подібне. Сполука (14) може бути отримана зі сполуки (13). Ця взаємодія являє собою амідування, при якому сполуку (13) піддають взаємодії з L галоїдангідрид кислоти формули R -C(С=О)-Hal. Для взаємодії може бути застосований той же метод, що і в способі отримання 3. Сполука (13) може бути отримана зі сполуки (12) з органічною основою, такою як 2ціаноацетамід (12a), сірка, TEA і тому подібне, в розчиннику, як правило, при нагріванні. Розчинник не має конкретних обмежень доти, поки він не заважає взаємодії, при цьому можна використовувати ДМФА або тому подібне. [0055] (Синтез вихідних матеріалів 7) Вихідна сполука (10-2) може бути отримана зі сполуки (17) і сполуки (17a). Ця взаємодія може бути здійснена додаванням мурашиної кислоти до сполуки (17) і сполуки (17a) в розчиннику, який інертний до взаємодії, і нагріванням і перемішуванням. Розчинник не має конкретних обмежень доти, поки він не заважає взаємодії, при цьому можна використовувати спирт або тому подібне. Сполука (17) може бути отримана амідуванням сполуки (15) і сполуки (16). Ця взаємодія може бути здійснена таким же чином, як метод, описаний в способі отримання 3. [0056] (Синтез вихідних матеріалів 8) 14 UA 116042 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 [0057] Вихідна сполука (4) може бути отримана зі сполуки (18) і сполуки (18a). Цей спосіб отримання являє собою, так зване, сполучення Сузукі і може бути здійснений таким же чином, як спосіб отримання сполуки (7) зі сполуки (8) згідно з синтезом вихідних матеріалів 2, як описано вище. [0058] Сполуку формули (I) виділяють і очищають у вигляді вільної сполуки, її солі, гідрату, сольвату або поліморфної кристалічної речовини. Сіль сполуки формули (I) може бути отримана здійсненням загальноприйнятої взаємодії з утворенням солей. Виділення і очищення здійснюють, використовуючи звичайні хімічні операції, такі як екстракція, фракційна кристалізація, різні типи фракційної хроматографії і тому подібне. Різні ізомери можуть бути отримані підбором відповідної вихідної сполуки або розділенням з використанням відмінності в фізико-хімічних властивостях ізомерів. Наприклад, оптичні ізомери можуть бути отримані загальним методом, що передбачає оптичне розділення рацемічних сполук (наприклад, фракційною кристалізацією для отримання діастереомерних солей з оптично активними основами або кислотами, хроматографією із застосуванням хіральної колонки або тому подібного, і іншими), і крім того ізомери можуть бути також отримані з відповідного оптично активного вихідного матеріалу. [0059] Фармакологічна активність сполуки формули (I) або її солі підтверджена приведеними нижче випробуваннями. [0060] (Матеріали) Склад середовища і склад буфера, що використовуються в приведених нижче прикладах випробування, показані нижче (концентрація кожного реагенту являє собою кінцеву концентрацію). Буфер KH (буфер Кребса-Хенселейта): водний розчин, що містить 119 мМ NaCl, 4,8 мМ KCl, 1,2 мМ KH2PO4, 1,2 мМ MgSO4, 2,5 мМ CaCl2, 25 мМ NaHCO3, 10 мМ глюкозу і 20 мМ Тріс-HCl (pH=7,4). Буфер А: водний розчин, що містить 0,32 М сахарозу, 1 мМ MgCl2 і 1 мМ K2HPO4. Буфер В: водний розчин, що містить 50 мМ Тріс-HCl (pH=7,7), 100 мМ NaCl, 10 мМ MgCl2, 2 мМ CaCl2, 0,2 мМ EGTA і 30 мкМ GDP. Буфер С: водний розчин, що містить 20 мМ Тріс-HCl (pH=7,7) і 5 мМ MgCl2. Основний буфер: водний розчин, що містить 2,5 мМ пробенецид, 20 мМ Hepes-NaOH (pH=7,5) і збалансований сольовий розчин Хенкса (HBSS), що містить 0,02 % CHAPS. Навантажений Fluo-4 розчин: основний буфер, що містить 1 мкМ Fluo-4 AM (Dojindo Molecular Technologies, Inc.), 0,067 % ДМСО і 0,0033 % Pluronic F-127 (Life Technologies). [0061] Приклад випробування 1: підтвердження PAM-дії випробуванням на зв'язування GTPγS Дію GABAB-рецептора сполуки за даним винаходом оцінюють, використовуючи 35 випробування на зв'язування [ S] GTPγS. Цей метод використовують для визначення PAM-дії сполуки на GABAB-рецептор (Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 2003, vol. 307(1), р. 322-330 і Molecular Pharmacology, 2001, vol. 60(5), р. 963-971). [0062] (Мембранні препарати) Кортикальну мембрану головного мозку мишей отримують згідно з методом отримання мембрани мозку щура (European Journal of Pharmacology, 1990, vol. 187 (1), р. 27-38). Вирізають кортикальний шар (близько 30 г) головного мозку 90 ddY мишей (Japan SLC, Inc.). До кортикальному шару додають буфер А (кортикальний шар/буфер А=близько 1:3 (мас./об.)) і гомогенізують скляним гомогенізатором з тефлоновим покриттям (Teflon: зареєстрована торгова марка) на льоду. Гомогенат центрифугують (750 г, 10 хв., 4 °C) і потім отримують супернатант. До осаду після центрифугування додають буфер А (90 мл) і гомогенізують на 15 UA 116042 C2 5 10 15 20 25 30 35 льоду, і потім отримують супернатант (750 г, 10 хв., 4 °C). Повторюючи цю операцію, збирають супернатант. Супернатант центрифугують (18000 г, 15 хв., 4 °C). До осаду після центрифугування додають ультрачисту воду (54 мл), залишають стояти на 30 хв. на льоду і потім центрифугують (39000 g, 20 хв., 4 °C). Осад після центрифугування суспендують в KH буфері (54 мл), повторно заморожують і розморожують, і центрифугують (18000 g, 15 хв.) при 4 °C. До осаду після центрифугування додають буфер і потім заморожують і розморожують, і цю операцію повторюють перед центрифугуванням. Методом Бредфорда з використанням кількісного визначення білка (розчин CBB для визначення білка; Nacalai Tesque, Inc.) отримують суспензію осаду в KH буфері при концентрації білка 10 мг/мл.) [0063] (Випробування на зв'язування GTPγS) Оцінюють PAM-дію випробуваного лікарського засобу на рецептор GABAB в кортикальному шарі головного мозку мишей. У кожну ямку 96-ямкового мікропланшета додають, у вказаній послідовності, випробуваний лікарський засіб, розведений буфером В до кожної концентрації (3 35 нМ до 30 мкМ), мембрану кортикального шару головного мозку мишей (4 мкг), [ S]-GTPγS (кінцева концентрація 0,34 нМ, Muromachi Yakuhin Co., Ltd.; Institute of Isotopes Co., Ltd.), GABA (кінцева концентрація 0,3 мкМ; Sigma) з подальшим вистоюванням при кімнатній температурі протягом 1 години. Використовуючи складальник клітин (Filtermate, Perkin-Elmer, Inc.), суспензію фільтрують з відсмоктуванням через скляний фільтр (96-ямкові фільтрувальні планшети UniFilter GF/В, Perkin-Elmer, Inc.). Скляний фільтр промивають буфером С, який був охолоджений льодом. Після висушування скляного фільтра в кожну ямку додають рідку 35 сцинтиляційну суміш (50 мкл, MicroScinti-PS; PerkinElmer, Inc.). Кількість [ S]-GTPγS, пов'язаного з мембраною, вимірюють на планшет-рідері (TopCount, PerkinElmer, Inc.). [0064] (Дані аналізу) Максимальну швидкість реакції 100 мкМ GABA приймають за 100 %. Швидкість реакції при відсутності GABA і випробуваного лікарського засобу приймають за 0 %. У той час, коли випробуваний лікарський засіб не додається, концентрація випробуваного лікарського засобу, яка збільшує швидкість реакції з 20 % при 0,3 мкМ GABA до 50 %, приймається за PAMпотенціал (мкМ) GABAB випробуваного лікарського засобу. У присутності 0,3 мкМ GABA максимальну швидкість реакції впливу на GABAB-рецептор при введенні не більше 30 мкМ випробуваного лікарського засобу приймають за PAM-ефективність (%) GABAB випробуваного лікарського засобу. [0065] Потенціал і ефективність деяких типових сполук по прикладах даного винаходу приведені нижче в таблиці (в таблиці, Пр. означає сполуку за прикладом №. "Потенціал" означає PAM-потенціал GABAB випробуваного лікарського засобу і "ефективність" означає PAMефективність (%) GABAB випробуваного лікарського засобу. Ці позначення застосовуються тут нижче). [0066] Таблиця 1 № Пр. 2 Пр. 4 Пр. 5 Пр. 7 Пр. 12 Пр. 31 Пр. 31-1 Пр. 39 Пр. 40 Пр. 43 Пр. 44 Пр. 45 Пр. 46 Пр. 47 Пр. 48 Потенціал (мкМ) 0,11 0,20 0,24 0,24 0,23 0,11 0,18 0,42 0,53 0,26 0,27 0,44 0,18 0,12 0,26 Ефективність (%) 207 161 176 139 377 300 191 165 203 118 119 134 188 240 238 № Пр. 55 Пр. 61 Пр. 72 Пр. 73 Пр. 74 Пр. 79 Пр. 101 Пр. 102 Пр. 104 Пр. 108 Пр. 127 Пр. 132 Пр. 142 Пр. 143 Пр. 144 16 Потенціал (мкМ) 0,25 0,24 0,089 0,085 0,19 0,046 0,38 0,40 0,079 0,20 0,11 0,15 0,0071 1,2 0,31 Ефективність (%) 175 160 289 272 244 230 134 127 218 176 338 218 214 182 182 UA 116042 C2 Продовження таблиці 1 Пр. 50 Пр. 51 Пр. 52 Пр. 54 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 0,54 0,15 0,17 0,32 Пр. 146 Пр. 151 Пр. 153 Пр. 155 222 249 259 88 0,10 0,12 0,059 0,046 258 168 180 159 [0067] Приклад випробування 2: підтвердження PAM-дії з використанням клітин, які стабільно експресують GABAB-рецептор Природний GABAB-рецептор має гетеродимерну структуру, що складається з двох видів субодиниць GABAB1 і GABAB2 (Nature, 1997, vol. 386, р. 239-246). В субодиниці GABAB1 існує два основні сплайс-варіанти, які називаються GABAB1a і 1b. Однак два варіанти не мають відмінностей по фармакологічних ефектах в рецепторних сигналах відділів, які нижче лежать (Природа, 1998, видання 396, р. 683-687). (Nature, 1998, vol. 396, р. 683-687). У HEK293 клітинах, які експресують гетеродимери GABAB1b і GABAB2, PAM-дію в присутності 2+ GABA оцінюють, вимірюючи зміну внутрішньоклітинної концентрації Ca з часом, використовуючи RFU (відносні одиниці флуоресценції) як показник. [0068] (Формування клітинних ліній, які експресують GABAB-рецептори) Всі вектори, де кожний вектор утворений GABAB1b (NM_021903. 2), GABAB2 (NM_005458. 7) людини або химерою Gαqo, включені ліпофекцією для формування стабільно експресуючих, що отримуються з людських ембріональних клітин нирок клітинних ліній, клітин HEK293 (ATCC). Gαqo химеру збирають наступним методом. Клонують гени, що кодують людський Gαq (NM_002072.3), і в Gαqo химері С-кінцевих 15 пар основ (1107-1121 bp) ORF (41-1121 bp) Gαq замінюють С-кінцевими 15 парами основ (1948-1962 bp) ORF (898-1962 bp) людського Gαо (NM_138736. 2). [0069] (Вимірювання внутрішньоклітинної мобілізації кальцію, зумовленої активацією GABA Bрецептора, за допомогою FLIPR) Зміна внутрішньоклітинної концентрації кальцію, мобілізованого в результаті активації GABAB-рецептора, вимірюють за допомогою спектрофотометра для зчитування планшетів для візуалізації флуоресценції (FLIPR, Molecular Devices). Стабільне експресуючі клітини, сформовані як описано вище, проліферують в DMEM-середовищі, що містить скриніговий реагент (розчин 0,5 мг/мл дисульфат G418 і 0,2 мг/мл гідроміцин В), 1 % пеніцилін/стрептоміцин 4 і 10 % FCS. Розбавляють приблизно до 1×10 клітини/ямку і висівають в 384-ямковий планшет з чорними стінками, покритий полі-D-лізином, (Becton Dickinson) в DMEM середовище, що містить 10 % FCS, але без селективного агента, і 1 % пеніцилін/стрептоміцин. Через 24 години видаляють середовище з планшета і в кожну ямку додають навантажений Fluo-4 розчин (20 мкл), з подальшою інкубацією при кімнатній температурі протягом 2 годин. Видаляють з кожної ямку навантажений флуоресцентним реагентом розчин, клітини тричі промивають основним буфером і потім додають в кожну ямку основний буфер (20 мкл), з подальшим аналізом на FLIPR ТЕТРА (Molecular Devices). Додають розчин лікарського засобу в основному буфері (10 мкл) до кінцевої концентрації (1 нМ-30 мкМ) і вимірюють викликані зміни флуоресценції. Після чого додають GABA (1 мкМ, 20 мкл) і продовжують вимірювання. Зміну флуоресценції вимірюють кожні дві або п'ять секунд.) [0070] (Дані аналізу) Максимальну швидкість реакції 100 мкМ GABA приймають за 100 %. Швидкість реакції при відсутності GABA і випробуваного лікарського засобу приймають за 0 %. У той час, коли випробуваний лікарський засіб не додається, концентрація випробуваного лікарського засобу, яка збільшує швидкість реакції з 5 % при 1 мкМ GABA до 50 %, приймається за PAM-потенціал (мкМ) GABAB випробуваного лікарського засобу. У присутності 1 мкМ GABA максимальну швидкість реакції впливу на GABAB-рецептор при введенні не більше 30 мкМ випробуваного лікарського засобу приймають за PAM-ефективність (%) GABAB випробуваного лікарського засобу. [0071] Результати оцінного випробування на FLIPR деяких характерних сполук по прикладах даного винаходу приведені нижче в таблиці 2. [0072] 17 UA 116042 C2 Таблиця 2 № Пр. 2 Пр. 31 5 10 15 20 25 30 35 40 Потенціал (мкМ) 0,059 0,22 Ефективність (%) 470 273 [0073] Приклад випробування 3: випробування Y-лабіринтом: ефект ослаблення когнітивного порушення Ефект ослаблення порушення короткочасної пам'яті сполукою за даним винаходом оцінюють, використовуючи випробування Y-лабіринтом, що являє собою експериментальну систему спонтанного чергування поведінки. [0074] (Експериментальна установка) Як Y-лабіринт використовують лабіринт, в якому кожний з трьох напрямних рукавів, з довжиною одного відгалуження 40 см, висотою стінки 13 см, шириною дна 3 см і шириною верхньої частини 10 см, приєднаний під кутом 120 градусів в формі Y. [0075] (Метод випробування) Випробувані лікарські засоби однократно, перорально вводять самцям ddY мишей віком 5-6тижнів (n=8) за 30 хвилин до початку випробування Y-лабіринтом і потім MK-801 (Sigma), який є антагоністом NMDA-рецептора, що спричиняє когнітивне порушення, вводять інтраперитонеально при дозі 0,15 мг/кг за 20 хвилин до початку випробування Y-лабіринтом. Далі, для мишей контрольної групи носій (0,5 % метилцелюлозу) використовують замість випробуваного лікарського засобу і фізіологічний розчин використовують замість MK-801. Для мишей в контрольній групі з MK-801 носій (0,5 % метилцелюлозу) використовують замість випробуваного лікарського засобу. Мишу вміщують з одного кінця в певне місце напрямного рукава в Y-лабіринті, і потім дають протягом 8 хвилин самостійно обстежити лабіринт і відмічають в які напрямні рукави проникають миші і в якому порядку. Підраховують число заходів мишей за час вимірювання і визначають як загальне число заходів. Серед них комбінацію, коли миші проникають в три різні напрямні рукави (наприклад, у випадку, коли три відгалуження позначені як a, b і с, відповідно, і порядок відгалужень із заходами abccbacab, число зараховується як 4, включаючи повтор), визначають як число спонтанного чергування поведінки. Що стосується рівня спонтанного чергування, рівень спонтанного чергування, обчислений по наступному рівнянню, приймають за індекс спонтанного чергування поведінки: Рівень спонтанного чергування = число спонтанного чергування поведінки/(загальне число заходів - 2)×100. Більш висока величина цього індексу вказує на те, що зберігається більше короткочасної пам'яті. [0076] (Дані аналізу) Виміряну величину виражають як середню величину±стандартна помилка. Аналіз істотної відмінності між контрольною групою і контрольною групою з MK-801 виконаний із застосуванням критерію Стьюдента. Далі, тест множинного порівняння Даннета виконаний при аналізі істотної відмінності між групою з випробуваним лікарським засобом, що вводиться, і контрольною групою з MK-801, і таким чином встановлено, що випробуваний лікарський засіб надає поліпшуючу дію на порушення здатності до навчання. У кожному випробуванні, якщо задовольняється р