Спосіб одержання пробіотика для тваринництва, переважно птахівництва

Способ получения пробиотика для животноводства, преимущественно птицеводства, путем раздельного культивирования, сепарирования и сушки штамма Enterococcus facclum ВКПМ № В-2575 и молочно-кислых бактерий с последующим смешиванием сухих монокультур, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что из молочнокислых бактерий используют штаммы Lactobacillus salivarius ВКПМ N? В-5001 и Lactobacillus fermentum ВКПМ № В-5006, а монокультуры смешивают при соотношении клеток 99,8:0,1-1,0:0.1-10,0 соответственно. Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается производства пробиотиков для птицеводства. Известны способы получения препара-' тов на основе молочнокислых бактерий (ацедофилин, ПАБК, СБА), которые рекомендуют использовать как в птицеводстве, так и в животноводстве. Они экологически чисты, нейтрализуют действие ксенобиотиков на микроорганизм и представляют альтернативу использованию антибиотиков в кормлении животных. Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому эффекту является способ получения пробиотика для сельскохозяйственных животных, предусматривающий раздельное культивирование, сепарирование и сушку штаммов Enterococcus faccium и Lactobacullus salivarius с последующим смешиванием сухих монокультур [1]. Препарат разработан для крупного рогатого скота, и для его получения используются штаммы, обладающие колонизационной способностью по отношению к эпителию желудочно-кишечного тракта телят. Однако пищеварительный тракт птиц имеет свои физиологические особенности, специфическую аутофлору, что не учтено в прототипе. В основу изобретения поставлена задача усовершенствования способа получения пробиотика для животноводства, преимущественно птицеводства, в котором за счет введения новых селекционированных культур молочнокислых бактерий обеспечивается направленное формирование и Стабилизация микробного.ценоза пищева С > О 21951 рительного тракта птиц и за счет этого обеспечивается увеличение их продуктивности и снижение отрицательного воздействия стрессов. Поставленная задача решается тем, что в способ получения пробиотика, включающий раздельное культивирование, сепарирование и сушку штамма Enterococcgs faccium ВКПМ № 2579 и молочно-кислых бактерий с последующим смешиванием сухих монокультур, согласно изобретению вводятся селекционированные культуры индигенной микрофлоры пищеварительного тракта птиц Lactobacullus salivarius ВКПМ № 5001 и Lactobacillus fermentum ВКПМ N? 5005, а монокультуры смешиваются при соотношении клеток 9-9,8:01:0,1-1,0 соответственно. Нормальная микрофлора цыплят формируется в течение первого месяца после вылупления [1]. Состав молочнокислых бактерий в этот период изменяется от энтерококков до преобладания определенных видов лактобацилл [2]. Антагонистическая активность обнаружена у 70% штаммов Lsulivarlus, 40% - Lfermentum, 25% Lbuchneri и практически у всех энтерококков. Установлено, что отдельные штаммы, обладающие значительной антагонистической активностью, способны адгезировать на эпителиальных клетках тонкого кишечника, кур (3), коленизируя его, синтезировать витамины группы В и другие биологически активные вещества,^устойчивы к действию ряда антибиотиков. Штаммы, составляющие основу препарата, селекционированы по вышеупомянутым признакам и депонированы во Всесоюзной коллекции промышленных м и к р о о р г а н и з м о в института "ВНИИгенетика". Представители селекционированных видов лактобацилл и энтерококков наиболее часто встречаются в составе нормальной микрофлоры пищеварительного тракта птиц (2). Штамм E.facclum ВКПМ В-2579 - факультативный анаэроб, каталозоотрицательный, образует аммиак из аргинина, гидролизует экскулин, растет в среде с рН 9,6 с 6,5% NaCI, 40% желчи, 4% таурохолата натрия, выживает после прогрева при 63°С в течение 30 минут, восстанавливает молоко с лакмусом и метиленовой синью, сбраживает маннозу, галактозу, трегалозу, мальтозу, сахарозу, раффинозу, глюкозу, лактозу, салицин, целлобиозу, фруктозу. Растет при температуре +10 и 50°С. Штамм синтезирует витамины группы В: тиамин 1,0-1,6 мкг/г СВ, рибофлавин 2022,5, никотиновую кислоту 450-675, пиридоксин 2-3,7; угнетает рост патогенных 5 10 15 20 25 30 35 40 . 4 кишечных палочек, сальмонелл, протея, стафилококка, шигелл; синтезирует ряд аминокислот, в том числе н е з а м е н и м ы е фенилаланин - 24 мкг/мл, лейцин - 29, лизин - 5, треонин - 1 1 ; обладает высоким индексом адгезивности к энтероцитам кищечника цыплят(4,68±2,67). Устойчив и малочувствителен (диаметр зон угнетения роста до 10 мм) к действию тетрациклина, олеандомицина, метициллина, оксациллина, аминогл икозидных антибиотиков (стрептомицина, канамицина). Штамм обладает антистрессовым и противоопухолевым действием. Оптимальная температура для роста 3744°С, рН среды 6,5-6,7, концентрация углеводов ( г л ю к о з ы , сахарозы) 1,7-2,2%, аминного азота ферментолизата БВК 20-60 мг%. Достигает высокой удельной скорости роста (1,4 ч 1 ). Штамм Lsalivarius ВКПМ В-5001 - факультативный анаэроб, каталазоотрицательный, сворачивает и слабо пептонизирует молоко, растет при 40% желчи, гомоферментативный, растет при 45°С, но не при 20 и 50°С, сбраживает фруктозу, галактозу, лактозу, мальтозу, маннит, маннозу, риффинозу, сахарозу, трегалозу, глюкозу, мелибиозу. Синтезирует витамины группы В: 950 мкг/гСВ никотиновой кислоты, 95 рибофлавина, 3,1 пиридоксина, 10 тиамина; аминокислоты: аланин - 17 мкг/мл, цистеин - 32, лейцин - 12, лизин 4; угнетает рост патогенных кишечных палочек, протея, сальмонелл, стафилококков. Адгезирует к энтероцитам кишечника цыплят, обладая колонизационной резистентностью (ИAM 1,3±0,51). Устойчив и малочувствителен к тетрациклину, олеандомицину, метициллину, оксациллину, аминогликозидам (стрептомицину, канамицину). Оптимальные условия для роста: температура 42-48°С, рН среды 5,8-6,0, концент45 рация углеводов (глюкозы, сахарозы) 2,2-2,5 %, аминного азота ферментолизата БВК 6488 мг%. Скорость роста при оптимальных условиях достигает 1,0 ч*1. Штамм Lfermentum ВКПМ В-5005- фа50 культативный анаэроб, каталазоотрицательный, гетероферментативный, сворачивает и слабопептонизирует молоко, растет в среде с 4% таурохолата а, растет при 45°С, но не при 15°С Сбраживает фрук55 тозу, галактозу, глюкозу, лактозу, мальтозу, раффинозу, сахарозу, мелибиозу, рибозу. Синтезирует витамины группы В: 125 мкг/гСВ никотиновой кислоты, 35 рибофлавина, 1,0 пиридоксина, 10,5 тиамина; угне 21951 ки концентрируют в 10-12 раз с помощью тает рост патогенных кишечных палочек, сепарирования и высушивают на распылисальмонелл, протея, клебсиолл. тельной сушилке при температуре воздуха Обладает способностью адгезировать к на входе - 95° и на выходе - 65°С для энтеэнтероцитэм кишечника цыплятам (ИАМ рококков и 65° на входе и 40° на выходе 1,42 ±0,58). Устойчив и малочувствителен к для лактобацилл. Влажность порошка не бодействию тетрациклина, левомицитина, лее 10%, активность 150-2000 млрд кл/г для олеандомицина, пенициллина, оксациллиэнтерококков и 1-10 млрд кл/г для лактобана, метициллина. цилл. Оптимальные условия для роста: темпеПрепараты сухих монокультур ратура 42-48°С, рН среды 5,8-6,0, концент- 10 E.faccium, Lsalivarius, Lfermentum смеширация углеводов (глюкозы, сахарозы) вают, чтобы получить соотношение клеток 2,2-2,5%, аминного азота ферментолизата 9-9,8:0,1-1,0:0,1-1,0, и стандартизуют кукуБВК - 64-88 мг%. Скорость роста при оптирузной мукой или цеолитом до активности мальных условиях достигает 0,7 ч" . 15 50 и/или 10 млрд кл/г. Культивирование, сепарирование и сушку штаммов осуществляют раздельно. П р и м е р 2. Пробиотик получают как Раздельное культивирование штаммов поописано выше, но с использованием при зволяет провести этот процесс при оптиприготовлении питательной среды свекломальных для каждой культуры параметрах, что обеспечивает получение высокого титра 20 вичной мелассы вместо ферментолизата клеток в культуральной жидкости и увеличекрахмала (учитывая содержание сахара в ние выхода готового препарата. мелассе). П р и м е р 3. Пробиотик получают как П р и м е р 1.С целю получения препаописано выше, но в питательную Среду дората готовят питательную среду, содержащую ферментативные гидролизаты 25 полнительно вносят 0,3% кукурузного экстракта в качестве источника ростовых крахмала и БВК в концентрациях, оптимальвеществ. ных для роста культур. Вносят 0,1% посевного материала и выращивают при Применение пробиотика в птицеводстоптимальных условиях с постоянно работаве обеспечивает формирование и стабилиющей мешалкой, без подачи воздуха; нуж- 30 зацию нормального микробного ценоза ное рН поддерживают 20%-ным водным пищеварительного тракта молодняка цыпаммиаком. Длительность ферментации в залят, повышение суточных лривесов и совисимости от культуры 9-18 ч, титр клеток в хранности, снижение затрат корма и культуральной жидкости 1-9 млрд/мл. Клетотрицательного действия стрессов. 35 Количество молочнокислых бактерий в содержимом зоба 15-дневных цыплят Группа Количество млн/г Контрольная Опытная Упорядник Замовлення 4462 в % к нормальному уровню 10±6,36 37±3,56 5,9±3,72 21,8±2,1 Техред М.Келемеш Коректор М. Керецман Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, Київ-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.ГагарІна, 101 І