Інгібітори протеази віл, фармацевтична композиція на їх основі та спосіб інгібування протеази реплікації віл

1 Сполука формули (9) Me О 2 Сполука за п 1 або її фармацевтично прийнятні сіль або сольват, які відрізняються тим, що R - Н 3 Сполука за п 1 або її фармацевтично прийнятні сіль або сольват, які відрізняються тим, що, коли 1 щонайменше одна з груп R, R' є групою алкіл-OR , 1 то R - Н 4 Сполука за п 1 або її фармацевтично прийнятні сіль або сольват, які відрізняються тим, що, коли щонайменше одна з груп R, R' є групою алкіл-OR1, то зазначений алкіл-OR1 обирають з групи, яку складають -С(СН3)2СН20Н, -СН(СН3)СН2ОН, СН2СН2ОН, -С(СН3)(СН2ОН)2, -С(СН3)2-О-СН2-ОСНз, С(СНз)2-О-СН2-О-СН31 -С(СН3)2СН2-О-ацил 5 Сполука за п 1 або її фармацевтично прийнятні сіль або сольват, які відрізняються тим, що, коли щонайменше одна з груп R, R' є циклоалкільною групою, заміщеною Сі-Сєалкілом або групою d Сєалкіл-ОН, то зазначену циклоалкільну групу обирають з сукупності, утвореної сполуками О ,9 де R та R' незалежно обирають з групи, яку утворюють Н, заміщена або незаміщена група алкілOR1, циклоалкільна група, заміщена dСєалкільною групою або групою Сі-Сбалкіл-ОН, гетероциклічна група, заміщена Сі-Сєалкільною групою або групою Сі-Сєалкіл-ОН, група алкілNR2R31 група anKin-S(X)(Y)R4, у яких R1 - Н, заміщений або незаміщений алкіл або ацильна група, R , R3 незалежно обрані з групи, яку складають Н, заміщений або незаміщений алкіл, циклоалкіл, гетероциклічна група, арильна група, ацильна група і сульфонільна група, R4 - Н, заміщений або незаміщений алкіл, циклоалкіл, гетероциклічна група або арильна група, X, Y незалежно є =0 або відсутні, а також и фармацевтично прийнятні сіль або сольват і ю -ъ 57772 WR — та 3 7 Сполука за п 1, яка відрізняється тим, що має формулу Н Me 6 Сполука за п 1 або її фармацевтично прийнятні сіль або сольват, які відрізняються тим, що, коли щонайменше одна з груп R, R' є циклоалкільною групою, заміщеною Сі-Сєалкілом або групою d Сєалкіл-ОН, то зазначену циклоалкільну групу обирають з сукупності, утвореної сполуками 0 або її фармацевтично прийнятні сіль або сольват 8 Сполука за п 2 або її фармацевтично прийнятні сіль або сольват, які відрізняються тим, що, коли R' є циклоалкільною групою, заміщеною d Сєалкілом або групою Сі-Сєалкіл-ОН, то зазначену циклоалкільну групу обирають з сукупності, утвореної сполуками СНзОН о СНзОН . R 9 Сіль за П 1 , яка відрізняється тим, що має формулу R Me .о R3 О 10 Фармацевтична композиція, яка містить (а) ефективну КІЛЬКІСТЬ сполуки за п 1 і (б) фармацевтично прийнятний носій для неї 11 Фармацевтична композиція, яка містить (а) ефективну КІЛЬКІСТЬ сполуки за п 7 і (б) фармацевтично прийнятний носій для неї 12 Спосіб інгібування протеази реплікації ВІЛ, який передбачає введення носію інфекції ефективної КІЛЬКОСТІ сполуки за п 1 або м фармацевтично прийнятної солі або сольвату 13 Спосіб інгібування протеази реплікації ВІЛ, який передбачає введення носію інфекції ефективної КІЛЬКОСТІ сполуки за п 7 або и фармацевтично прийнятної солі або сольвату 14 Сполука за п 1, яка відрізняється тим, що має чистоту вище 90% 15 Сполука за п 1, яка відрізняється тим, що має чистоту щонайменше 95% 16 Сполука за п 1, яка відрізняється тим, що має чистоту щонайменше 97% 17 Сполука за п 1, яка відрізняється тим, що має чистоту щонайменше 99% 18 Сполука за п 7, яка відрізняється тим, що має чистоту вище 90% 19 Сполука за п 7, яка відрізняється тим, що має чистоту щонайменше 95% 20 Сполука за п 7, яка відрізняється тим, що має чистоту щонайменше 97% 21 Сполука за п 7, яка відрізняється тим, що має чистоту щонайменше 99% 22 Фармацевтична композиція за п 10, яка відрізняється тим, що сполука має чистоту вище 90% 23 Фармацевтична композиція за п 10, яка відрізняється тим, що сполука має чистоту щонайменше 95% 24 Фармацевтична композиція за п 10, яка відрізняється тим, що сполука має чистоту щонайменше 97% 57772 6 25 Фармацевтична композиція за п 10, яка відрізняється тим, що сполука має чистоту щонайменше 99% 26 Фармацевтична композиція за п 11, яка відрізняється тим, що сполука має чистоту вище 90% 27 Фармацевтична композиція за п 11, яка відрізняється тим, що сполука має чистоту щонайменше 95% 28 Фармацевтична композиція за п 11, яка відрізняється тим, що сполука має чистоту щонайменше 97% 29 Фармацевтична композиція за п 11, яка відрізняється тим, що сполука має чистоту щонайменше 99% 30 Спосіб за п 12, який відрізняється тим, що сполука має чистоту вище 90% 31 Спосіб за п 12, який відрізняється тим, що сполука має чистоту щонайменше 95% 32 Спосіб за п 12, який відрізняється тим, що сполука має чистоту щонайменше 97% 33 Спосіб за п 12, який відрізняється тим, що сполука має чистоту щонайменше 99% 34 Спосіб за п 13, який відрізняється тим, що сполука має чистоту вище 90% 35 Спосіб за п 13, який відрізняється тим, що сполука має чистоту щонайменше 95% 36 Спосіб за п 13, який відрізняється тим, що сполука має чистоту щонайменше 97% 37 Спосіб за п 13, який відрізняється тим, що сполука має чистоту щонайменше 99% Винахід стосується нової сукупності ХІМІЧНИХ сполук, що можуть використовуватись як інгібітори протеази ВІЧ, і використання таких сполук як антивірусних агентів Синдром Набутого Імунодефіциту (СНІД) є порівняно нещодавно розпізнаним захворюванням або станом СНІД повільно руйнує імунну систему організму і викликає прогресивне погіршення стану центральної та периферійної нервових систем З часу його першого розпізнання на початку 80-х років СНІД швидко поширився і вже досяг масштабів епідемії серед певних верств населення Інтенсивні дослідження дозволили виявити агента, відповідального за хворобу, а саме, Тлімфотропічного ретровіруса III людини (ТЛВЛ-ІІІ), який частіше називають вірусом імунодефіциту людини (ВІЛ) ВІЛ належить до класу вірусів відомих як ретровіруси Геном ретровіруса складається з РНК, яка перетворюється у ДНК зворотною транскрипцією Потім ЦЯ ретровірусна ДНК стійко вбудовується у хромосому клітин організму і, використовуючи для цього репликативні механізми цих клітин, виробляє нові ретровірусні частини і розповсюджує інфекцію на ІНШІ клітини Вважається, що ВІЛ має особливу спорідненість до клітин лімфоцитів Т-4 людини Інфікування ВІЛ цих білих кров'яних клітин зменшує їх КІЛЬКІСТЬ і, нарешті, імунна система стає непрацездатною і неефективною проти різних хвороб, наприклад, пневмонії Pneumocystic Carmi, саркоми Капосі і раку лімфосистеми Хоча механізм формування і функціонування ВІЛ залишається не зовсім зрозумілим, ідентифікація віруса дозволила досягти певного прогресу у контролі хвороби Було, наприклад, виявлено, що азидотимідинові ліки ефективно інгібують зворотну транскрипцію ретровірусного генома ВІЛ і, таким чином, забезпечують якщо не лікування, то затримання розвитку хвороби у пацієнтів, вражених СНІД Продовжуються пошуки ЛІКІВ, здатних вилікувати або принаймні поліпшити контроль ВІЛ Звичайно ретровірусна реплікація забезпечує посттрансляційну обробку поліпротешів Цю обробку здійснює вірально закодована протеаза ВІЛ, створюючи зрілі поліпептиди, які потім сприяють формуванню і функціонуванню інфекційного вірусу Якщо придушити цей молекулярний процес, то нормальне продукування ВІЛ зупиниться Таким чином, інгібітори протеази ВІЛ можуть діяти проти ВІЛ як анти-вірусні агенти Протеаза ВІЛ є одним з трансльованих продуктів гену рої структурного протеїну ВІЛ Ця ретровірусна протеаза специфічно діє на ІНШІ структурні поліпептиди, розщеплюючи їх у дискретних сайтах з вивільненням цих щойно активованих структурних протеїнів і ферментів і роблячи цим вірюн репликативно-компетентним Отже, інгібування протеази ВІЛ сильними сполуками може відвернути провірусне інтегрування інфікованих Е-лімфоцитів 57772 у ранній фазі життєвого циклу ВІЛ-1, а також інгібувати вірусний протеолітичний процес на ПІЗНІЙ стадії Крім того, шпбитори протеази є легко доступними, мають довшу тривалість життя у вірусі і менш токсичні, ніж існуючі ліки, можливо, завдяки їх специфічності до ретровірусної протеази Винахід стосується нового класу ХІМІЧНИХ сполук, здатних інгібувати і/або блокувати активність протеази ВІЛ і припиняти розповсюдження віруса ВІЛ, фармацевтичних композицій, що містять ці сполуки і використання цих сполук як інгібіторів протеази ВІЛ Винахід стосується сполук загальної формули (9), наведеної далі, їх фармацевтичне прийнятних солей, пропрепаратів і сольватів, здатних інгібувати протеазу, кодовану ВІЛ типу ВІЛ-1 або ВІЛ-2 Ці сполуки можуть використовуватись для лікування інфекцій ВІЛ і СНІД Ці сполуки, їх фармацевтичне прийнятні солі і фармацевтичні композиції згідно з винаходом можуть використовуватись як окремо, так і у сполученні з іншими анти-вірусними або імуномодулюючими агентами, або разом з антибіотиками або вакцинами Сполуки згідно з винаходом можуть бути використані також як пропрепарати Винахід включає також способи лікування СНІД, способи лікування ВІЛ-шфекцій і способи інгібування протеази ВІЛ Винахід включає сполуки формули (9) .SPh 8 СН(СН3)СН2ОН, -СН2СН2ОН, -С(СНз)(СН2ОН)2, С(СНз)2-О-СН2-О-СН3, С(СНз)2-О-СН2-О-СН3 і С(СНз)2СН2-О-ацил або їх фармацевтично прийнятні пропрепарат, сіль або сольват Якщо щонайменше одна з груп R, R' є циклоалкільною групою, заміщеною Сі-Сєалкілом або групою Сі-Сбалкіл-ОН, циклоалкільну групу бажано обирати з групи, утвореної С СН, СН, СИ, СНрН СИ, СНзОН Якщо щонайменше одна з груп R, R' є гетероциклічною групою, заміщеною Сі-Сєалкілом або групою Сі-Сбалкіл-ОН, гетероциклічну групу бажано обирати з групи, утвореної N-Rj де RJ-H, заміщений або незаміщений алкіл, циклоалкіл, гетероциклічна група або арильна група, або ацильна група, або сульфонільна група, Бажаною сполукою формули (9) є [3S[2(2S*,3S*), 3-а, 4а-р, 8а-р]]-Ы-(1,1-диметил-2пдроксіетил)декапдро-2-[2-пдрокси-3-[(3-пдрокси2-метилбензоіл)аміно]-4-(фенілтю)бутил]-3ізохшолшкарбоксамід C Me де R та R' незалежно обирають з групи, яку утворюють Н, заміщена або незаміщена група алкіл-OR1, циклоалкільна група, заміщена С г Сєалкільною групою або групою Сі-Сбалкіл-ОН, гетероциклічна група, заміщена Сі-Сєалкільною групою або групою Сі-Сєалкіл-ОН, група алкілNR2R31 група anKin-S(X)(Y)R4, у яких R1-H, заміщений або незаміщений алкіл або ацильна група, R2, R незалежно обрано з групи, яку складають Н, заміщений або незаміщений алкіл, циклоалкіл, гетероциклічна група, арильна група, ацильна група і сульфонільна група, R4-H, заміщений або незаміщений алкіл, циклоалкіл, гетероциклічна група або арильна група, X, Y незалежно є = О або відсутні, а також и фармацевтичне прийнятні пропрепарат, сіль або сольват Бажано, щоб R була Н, R' була циклоалкільною групою, обраною з групи, утвореної С- О . С з ІЬ Н И Бажано, щоб у сполуках формули 9 щонайменше одна з груп R, R' була групою алкіл- OR1, де R1-H Зокрема, якщо щонайменше одна з груп R, R' є групою алкіл-OR1, то алкіл-OR1 обирають з групи, яку складають -С(СНз)2СН2ОН, і його фармацевтичне прийнятні солі і аналоги пропрепарату- Бажані пропрепа-рати можна одержати заміною гідрогену у одній з спиртових груп ациловою групою, краще амінокислотною ациловою групою Винахід, крим того, включає фармацевтичні композиції, які містять ефективну КІЛЬКІСТЬ сполуки формули (9) або її фармацевтичне прийнятної солі у спорученні з фармацевтичне прийнятним носієм, наприклад, розріджувачем або наповнювачем Винахід включає також спосіб лікування СНІД, який передбачає уведення носію інфекції або пацієнту, наприклад, примату, ефективної КІЛЬКОСТІ сполуки згідно з винаходом Винахід, крім того, включає спосіб інгібування реплікації ВІЛ, який передбачає уведення у інфіковану ВІЛ клітину, або у клітину, чутливу до такого інфікування, організма носія інфекції або пацієнта, наприклад, примата, ефективної КІЛЬКОСТІ сполуки згідно з винаходом Винахід включає нові сполуки загальної формули (9), описаної вище, які можна використати для лікування інфекції ВІЛ і/або СНІД Посиланням включено патент США 5 484 926, заявки 08/708 411 та 08/708 607 на патент США і заявки JP 95-248183 та JP-95-248184 на патент Японії з зауваженням, що усі визначення, терміни, ЗМІННІ, позначення тощо, використані у цих доку 57772 ментах, стосуються лише ВІДПОВІДНОГО документа Деякі з цих незалежних один від одного документів можуть містити однакові терміни або позначення Наприклад, змінна X, спільна для усіх документів може відповідати різним замісникам або угрупованням у різних документах Фахівцю зрозуміло, що у кожному окремому документі значення змінних обмежені їх застосуванням саме у цьому документі і тому позначення змінних можна замінити за умови, що вони все одно відповідатимуть тим же конкретним замісникам і угрупованням Сполуки формули (9) можуть бути пропрепаратами, які поліпшують фармацевтичні характеристики сполуки, наприклад такі фармакокшетичні якості, як бюзасвоюваність або розчинність сполуки Виготовляти пропрепарати можна у звичайні способи, ВІДОМІ фахівцям Бажаний пропрепарат можна приготувати ацилюванням або алкілюванням вихідного спирту, у якому R або R' СН(СН3)2СН2ОН Усі температури наведено у °С, усі одиниці вимірювання-це одиниці маси за винятком рідин, для яких використано одиниці об'єму Термін "алкіл" стосується ЛІНІЙНИХ або розгалужених ланцюгових груп, які, бажано, мають 1-8, краще, 1-6, найкраще 1-4 атомів карбону Термін "Сі-Сбалкіл" стосується лінійної або розгалуженої ланцюгової групи з 1-6 атомами карбону Прикладами Сі-СєалКІЛІВ можуть бути метил, етил, ппропіл, ізопропіл, бутил, ізобутил, втор-бутил, tбутил, пентил, неопентил, гексил, ізогексил тощо Термін "Сі-Сбалкіл" включає термін "Сі-С4алкіл" Термін "циклоалкіл" стосується насиченого або частково насиченого моно- або полікарбоциклічного кільця з 5-14, бажано, 3-7, ще краще з 3-6 атомами карбону, прикладами якого є циклопропіл, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил тощо Прикладом циклоалкілу є CsСуциклоалкіл, який є насиченим пдрокарбо-новим кільцем з 5-7 атомами карбону Термін "алкоксил" стосується -О-алкілу Прикладом є С-і-Сєалкоксил, який є ЛІНІЙНИМ або розгалуженим алкільним ланцюгом з 1-6 атомами карбону, з'єднаними з атомом кисню Прикладами Сі-Сєалкоксильних груп можуть бути метоксил, етоксил, пропоксил, ізопропоксил, бутоксил, вторбутоксил, t-бутоксил, пентоксил, гексоксил тощо Термін " Сі-Сєалкоксил" включає термін " d С4 алкоксил" Термін "арил" стосується карбоциклічного або гетероциклічного, ароматичного 5-14-членного моно або поліциклічного кільця Прикладами арилів можуть бути феніл, нафтил, антрил, фенантрил, тіеніл, піроліл, імідазоліл, піразоліл, фурил, ізотіа-золіл, фуразаніл, ізоксаліл, тіазоліл, піридил, піразиніл, піримідиніл, піридазиніл, тріазиніл, бензо[Ь]тиеніл, нафто[2,3-Ь]тіантреніл, ізобензофураніл, хроменіл, ксантеніл, феноксатіеніл, ІНДОЛІЗИніл, ІЗОІНДОЛІЛ, ІНДОЛІЛ, індазоліл, пуриніл, ІЗОХІНОЛІЛ, ХІНОЛІЛ, фтапазиніл, нафтиридиніл, хі ноксіалініл, ХІНЗОЛІНІЛ, бензотіазоліл, бензимідазоліл, тетрапдрохінолшіл, ЦИНОЛІНІЛ, птеридиніл, карбазоліл, бета-карболініл, фенантри-диніл, акрид иніл, перимідиніл, фенантролініл, феназиніл, ізотіазоліл, фенотіазиніл і феноксазиніл 10 Термін "арилоксил" стосується -О-арилу Термін "здатна до гідролізу група" стосується групи, яка, будучи з'єднана з киснем, утворює естер, що може бути пдролізований з утворенням гідроксильної групи Прикладами є, як варіант, заміщені ацильні, сульфонатні та фосфатні функціональні угруповання, а також блоковані або неблоковані амінокислотні, гемісукцинатні та никотинатні залишки Галоген-це фтор, хлор, бром або юд Термін "карбоцикл" стосується ароматичного або насиченого або частково насиченого 5-14 членного моно- або ПОЛІЦИКЛІЧНОГО КІЛЬЦЯ, наприклад, 5-7-членного моно- або 7-10-членного біциклічного кільця, у якому усі члени є атомами карбону Термін "гетероцикл" стосується ароматичного або насиченого або частково насиченого 5-14 членного моно- або ПОЛІЦИКЛІЧНОГО КІЛЬЦЯ, наприклад, 5-7-членного моно- або 7-10-членного біциклічного кільця з 1-3 гетероатомами, обраними з сульфуру, азоту і кисню, у якому будь-який з гетероатомів азоту і сульфуру, як варіант, можуть бути окиснені, а будь-який з гетероатомів азоту може бути кватер-нізований Гетероциклічне кільце може бути приєднане до будь-якого придатного гетеро- або карбонового атома Приклади включають декапдроізохінолшіл, окта-пдротіено[3,2с]піридиніл, піперидиніл, піперазиніл, азепініл, піроліл, піролідиніл, піразоліл, піролідиніл, піразоліл, піразолідиніл, фурил, ізотіазоліл, фуразаніл, ізоксаліл, тіазоліл, піридил, піразиніл, піримідиніл, піридазиніл, імідазоліл, ізобензофураніл, фуразиніл, імідазолініл, імідазолідиніл, піридил, піразиніл, піримідиніл, піридазиніл, оксазоліл, оксазолідиніл, ізоксазоліл, тіантреніл, тріазиніл, ізоксалідиніл, морфолініл, тіазоліл, таїзолідиніл, ізотіазоліл, хінуКЛІДИНІЛ, ізотіазолідиніл, ІНДОЛІЛ, ХІНОЛІНІЛ, хроме ніл, ксантеніл, ІЗОХІНОЛІНІЛ, бензимідазоліл, тіадіазоліл, бензопіраніл, бензотіазоліл, бензоазоліл, фурил, тетрапдрофурил, тетрапдропіраніл, тіеніл, бен-зотіеніл, бензо[Ь]тіеніл, нафто[2,3-Ь]тіеніл, тіаморфолініл, тіаморфолінілсульфоксид, тіаморфолінілсульфон, оксадіазоліл, тріазоліл, тетрапдрохшолініл, тетра-пдроізохінолініл, феноксатіеніл, ІНДОЛІЗИНІЛ, ІЗОІНДОЛІЛ, індазоліл, пуриніл, ІЗОХІНО ЛІЛ, ХІНОЛІЛ, фталазиніл, нафтипіридиніл, хіноксаЛІНІЛ, ХІНЗОЛІНІЛ, ЦИНОЛІНІЛ, птеридиніл, карбазоліл, бета-карболініл, фенантридиніл, акридиніл, перимідиніл, фенантролініл, феназиніл, ізотіазоліл, фенотіазиніл і феноксазиніл Термін "тюетер" включає S-арил, наприклад, фенілтю і нафтілтю, насичений або частково насичений S-гетероцикл, 3-(С5-С7)циклоалкіл і Sалкіл, наприклад, (Сі-Сб)алкілтю У тюетері -арил, -гетероцикл, -циклоалкіл і -алкіл, як варіант, можуть бути заміщеними Прикладом тюетеру є (СІСє)алкілтю, який являє собою ЛІНІЙНИЙ або розгалужений алкільний ланцюг з 1-6 атомами карбону, приєднаний до атома сульфуру Групи ( d Сє)алкілтіо включають метилтю, етилтю, пропілтю, ізопропілтю, бутилтю, втор-бутилтю, t-бутилтю, пентилтю, гексилтю тощо Термін "меркапто" означає -SH Термін "зміно" стосується сполук формули Nl_il_2, у яких l_i, І 2 бажано незалежно обирати з _ 12 11 57772 групи, утвореної киснем, карбоциклічною і гетроли -SO2-L5, де І_5-бажано, алкіл, аміногрупа, арил, циклічними групами, алкілом, сульфонілом і гідроциклоалкіл або гетероцикл Алкіл, арил, циклоалгеном, або сполук формули І\ІС(О)І_з, де І_з, бажакіл і гетероцикл, як варіант, можуть бути заміщено, є алкілом, алкоксилом, гідрогеном або —NL-|I_2 ними Прикладом сульфонілу є Сг Як варіант, аліл, алкіл і алкоксильні групи можуть С4алкілсульфоніл, який являє собою ЛІНІЙНИЙ або бути заміщеними Прикладом аміну є d розгалужений алкільний ланцюг з 1-4 атомами С4алкіламін, який являє собою ЛІНІЙНИЙ або розгакарбону, приєднаними до сульфонільного угруполужений алкільний ланцюг з 1-4 атомами карбону вання Приклади Сі-С4алкілсульфонільних груп Прикладами Сі-С4алкіламшових груп можуть бути включають метилсульфоніл, етил сульфоніл, проетиламшо-, метиламшо-, пропіламшо-, ізопропілсульфоніл, ізопропілсульфоніл, бутил сул ьфопіламшо-, бутиламшо-, втор-бутиламиногрупа тоніл, втор-бутилсульфоніл тощо що Іншим прикладом аміну є ди-Сі-С4алкіламш, Як уже відзначалось, деякі з груп можуть бути який являє собою два ЛІНІЙНІ або розгалужені алкізаміщеними Фактично усі згадані групи, якщо не льні ланцюги, кожен з яких має 1-4 атоми карбону, зумовлено інше, можуть бути заміщеними або неприєднані до спільної аміногрупи Приклади ди-Сг заміщеними Наприклад, алкіли можуть бути як С4алкіламінових груп включають диметиламіне-, заміщеними, так і незаміщеними, якщо це окремо етил метиламшо-, метил пропіламшо-, етилізопроне зумовлено Прикладами замісників для алкілу піламшо-, бутил метиламшо-, вторта арилу можуть бути меркапто-, тюе-терна, нітро (NO2)-, амшо-, арилоксильна, галогено-, гідроксибутилетиламшогрупу тощо Прикладом аміногрупи льна, апкоксильна і ацильна групи, а також арильє також Сі-С4алкілсульфоніламшогрупа, яка являє на, циклоалкільна і насичені і частково насичені собою ЛІНІЙНИЙ або розгалужений алкільний лангетеро-цикли Приклади замісників для гетероцикцюг з 1-4 атомами карбону, приєднаними до сульлу і циклоалкілу включають замісники, перелічені фоніламшового угруповання Прикладами d для алкілу та арилу, а також арил і алкіл С^алкілсульфоніламінової групи можуть бути етилсульфоніламшо-, метилсульфоніламшо-, пропілПриклади заміщених арилів включають фенісульфоніламіно-, ізопропілсульфоніламшо-, бутильне або нафтильне кільце, заміщене одним або лсульфоніламшо-, вторбільше замісниками, бажано, одним-трьома, незалежно обраними з групи, яку складають галоген, бутилсульфоніламиногрупа тощо гідроксил, морфолш(Сі-С4)алкоксикарбоніл, піриТермін "ацил" стосується сполук формули дил(Сі-С4ал ко кс и карбоніл, галоген(Сі-С4)алкіл, d І_бС(О)І_4, де L6 -одиночний зв'язок, -О або -N, а І_4 С4алкіл, Сі-С4алкоксил, карбоксил, dалкіл, аміногрупа, гідроксил, алкоксил або гідроС4алкокси карбоніл, карбамоїл, N-(Cr ген Як варіант, алкільна та алкоксильна групи можуть бути заміщеними Прикладом ацилу є d С4)ал кіл карбамоїл, аміногрупа, dС4алкоксикарбоніл, який являє собою ЛІНІЙНИЙ або С4алкіламіногрупа, ди(С-і-С4)алкіламіногрупа і грурозгалужений алкоксильний ланцюг з 1-4 атомами па формули -(CH2)a-R7, де а=1, 2, 3 або 4, a Ry карбону, приєднаними до карбонільного угрупопдроксил, С1-С4 алкоксил, карбоксил, dвання Прикладами Сі-С4алкоксикарбонільних груп С4алкокси карбоніл, аміногрупа, карбамоїл, d є метоксикарбоніл, етоксикарбоніл, пропоксикарС4алкіламіногрупа або ди(Сі-С4)алкіламіногрупа боніл, ізопропоксикарбоніл, бутоксикарбоніл тощо Крім того, заміщеним алкілом є галоген(Сг Іншим прикладом ацилу є карбок-сигрупа, у якій С4)алкіл, який являє собою ЛІНІЙНИЙ або розгалуІ_б-одиночний зв'язок, а І_4-алкоксил, гідроген або жений алкільний ланцюг з 1-4 атомами карбону, до гідроксил Ще одним прикладом ацилу є N-(Cr яких приєднані 1-3 атоми галогену Прикладами С4)алкілкарбамоіл (І_є-одиночний зв'язок, а І_4галоген(Сі-С4)алкільних груп є хлорметил, 2амшогрупа), який являє собою ЛІНІЙНИЙ або розгаброметил, 1-хлорізопропіл, 3-фторпропіл, 2,3лужений алкільний ланцюг з 1-4 атомами карбону, дибромбутил, 3-хлорізобутил, юд+бутил, трифтоприєднаними до атому азоту карбамоільного угрурметил тощо повання Прикладами N-(Cr Іншим заміщеним алкілом є пдрокси(Сг С4)алкілкарбамоільних груп є N-метилкарбамоіл, С4)алкіл, який являє собою ЛІНІЙНИЙ або розгалуN-етилкарбамоіл, N-пропілкарбамоіл, Nжений алкільний ланцюг з 1-4 атомами карбону з ізопропілкарбамоїл, N-бутил карбамоїл, N-tприєднаною до нього гідроксильною групою Прибутилкарбамоїл тощо Іншим прикладом ацилу є кладами пдрокси(Сі-С4)алкільних груп є пдроксиг\І,г\І-ди(Сі-С4)алкілкарбамоіл, який має дві ЛІНІЙНІ метил, 2-пдроксіетил, 3-пдроксипропіл, 2або розгалужені алкільні ланцюги з 1-4 атомами пдроксмзопропіл, 4-пдроксибутил тощо карбону кожний, приєднані до атому азоту карбаЩе одним заміщеним алкілом є d моїл ьного угруповання Прикладами N,N-flH(CiС4алкілтю(Сі-С4)алкіл, який являє собою лінійну С4)ал кіл карбамоїл ьних груп є N,Nабо розгалужену Сі-С4алкільну групу з приєднадиметилкарбамоїл, N.N-етилметилкарбамоіл, N,Nною до неї Сі-С4апкілтюгрупою Прикладами d метил пропіл карбамоїл, N,NС4алкілтю(Сі-С4)ал кіл ьних груп є метилтюиметил, етилізопропіл карбамоїл, N,Nетилтюметил, пропілтюпропіл, втор-бутилтюметил бутил метил карбамоїл, N.N-втортощо бутилетилкарбамоїл тощо Іншим заміщеним алкілом є гетероциклічний (Сі-С4)алкіл, який являє собою ЛІНІЙНИЙ або розгаТермін "сульфшіл" стосується сполук формули лужений алкільний ланцюг з 1-4 атомами карбону -SO-I_7, де І_7-бажано, алкіл, аміногрупа, арил, цикз приєднаним до нього гетероциклом Прикладами лоалкіл або гетероцикл Алкіл, арил, циклоалкіл і гетероциклічних (Сі-С4)зл кіл ьних груп є піролілгетероцикл, як варіант, можуть бути заміщеними метил, хшолшіл метил, 1-шдолшілетил, 2Термін "сульфоніл" стосується сполук форму 57772 14 13 фурилетил, З-тіен-2-ілпропіл, 1сон імідазолілізопропіл, 4-тіазолілбутил тощо wrll Ще одним заміщеним алкілом є арил(Сг С^алкіл, який являє собою ЛІНІЙНИЙ або розгалужений алкільний ланцюг з 1-4 атомами карбону з приєднаним до нього арилом Прикладами арил(Сі-С4)алкільних груп є феніл метил, 2фенілетил, 3-нафтилпропіл, 1-нафтилізопропіл, 4фенілбутил тощо Внаслідок наявності цих центрів сполуки згідно Гетероцикл може бути, наприклад, заміщений з винаходом можуть існувати у будь-якій можливій 1-3 замісниками, незалежно обраними з групи, яку стереомеричній формі і можуть використовуватись складають галоген, галоген (С-і-С^ап кіл, dяк суміш оптично активних або рацемічних стеС4алкіл, Сі-С4алкоксил, карбоксил, dреомерів, або поодинці як суттєво чисті (щонаймеС4алкокси карбоніл, карбамоїл, N-(Cr нше на 95%) стереомери Винахід включає усі С4)алкілкарбамоіл, аміногрупа, dасиметричні форми, індивідуальні стереоізомери і С4алкіламіногрупа, ди(Сі-С4)алкіламшогрупа і груїх сполучення па формули -(CH2)a-R7, де а = 1, 2, 3 або 4, a Ry Індивідуальні стереоізомери можуть бути припдроксил, Сі-С4алкоксил, карбоксил, dготовлені з ВІДПОВІДНИХ попередників за допомоС4алкокси карбоніл, аміногрупа, карбамоїл, d гою описаних вище процедур, розрізненням рацеС4алкіламіногрупа або ди(Сі-С4)алкіламіногрупа, мічних сумішей або відокремленням Приклади заміщених гетероциклів включають діастереомерів Розрізнення можна здійснювати у 3-І\І-1:-бутилкарбоксаміддекапдро-ізохінолініл, 6-Nприсутності розрізнюючого агента, хроматографі1:-бутилкарбоксамідоктапдротіено[3,2-с]піридиніл, єю або багаторазовою кристалізацією або шляхом 3-метилімідазоліл, 3-метоксипіридил, 4сполучення цих способів, добре відомих фахівцям хлорхшолініл, 4-амшотіазоліл, 8-метилхінолшіл, 6Подальші деталі можна знайти у Jaques et al , хлорхшоксалініл, 3-етилпіридил, 6Enantiomers, Racemates and Resolutions, John метоксибензимідазоліл, 4-пдроксифурил, 4Wiley & Sons, 1981 МЄТИЛІЗОХІНОЛІНІЛ, 6,8-дибромхінолшіл, 2-метилБажано використовувати суттєво чисті (більш 1,2,3,4-тетрапдроізохінолшіл, І\І-МЄТИЛХІНОЛІНІЛ-2як на 50%) сполуки згідно з винаходом, краще щоіл, 2-1:-бутоксикарбоніл-1 ,2,3,4-ІЗОХІНОЛІН-7-ІЛ тощо найменше 75%-оі чистоти, ще краще щонайменше Приклади гетероциклічних кільцевих систем А 90%-оі, ще краще щонайменше 95%-оі, ще краще або В включають (1) 5-членні МОНОЦИКЛІЧНІ кільцеві щонайменше 97%-оі, найкраще щонайменше 99%групи, наприклад, тіеніл, піроліл, імідазоліл, піраоі чистоти золіл, фурил, ізотіазоліл, фуразаніл, ізоксаліл, Як уже відзначалось, винахід включає фарматіазоліл тощо, (2) 6-членні МОНОЦИКЛІЧНІ кільцеві цевтично прийнятні солі сполук формули (9) Спогрупи, наприклад, піридил, піразиніл, піримідиніл, лука згідно з винаходом може містити достатньо піридазиніл, тріазиніл тощо і (3) ПОЛІЦИКЛІЧНІ кількислотні або достатньо основні функціональні груцеві групи, наприклад, декапдроізохінолшіл, октапи, або і ті і ІНШІ, і, ВІДПОВІДНО, вступати у реакцію з пдротіено[3,2-с]піридиніл, бензо[Ь]тіеніл, нафбудь-якою з великої КІЛЬКОСТІ органічних і неоргато[2,3-Ь]тіеніл, ізобензофураніл, хроменіл, нічних основ і органічних і неорганічних кислот, ксантеніл і їх повністю або частково насичені анаутворюючи фармацевтично прийнятні солі логи Термін "фармацевтично прийнятна сіль" стоЯк варіант, циклоалкіл може бути заміщений сується солей сполуки формули (9), які є суттєво 1-3 замісниками, незалежно обраними з групи, яку нетоксичними для живих організмів Прикладами складають галоген, галоген(Сі-С4)алкіл, dфармацевтично прийнятних солей можуть бути С4алкіл, Сі-С4алкоксил, карбоксил, dсолі, одержані реакцією сполук згідно з винаходом С4алкокси карбоніл, карбамоїл, N-(Cr з органічною або неорганічною кислотою або неС4)ал кіл карбамоїл, аміногрупа, dорганічною базою Для солей приєднання кислот С4алкіламіногрупа, ди(Сі-С4)алкіламшогрупа і груреакцію звичайно проводять у спільному розчинпа формули -(СЬІ2)а-Де а=1, 2, 3 або 4, a Ry нику, наприклад, діетилетері або бензолі, а для пдроксил, Сі-С4алкоксил, карбоксил, dсолей приєднання основу воді або спирті ЗвичайС4алкокси карбоніл, аміногрупа, карбамоїл, d но солі випадають у осад протягом від 1год до 10 С4алкіламіногрупа або ди(Сі-С4)алкіламіногрупа днів, після чого їх можна відокремити фільтруванПриклади заміщених циклоалкільних груп включаням або у інший відомий спосіб ють 3-метилциклопентил, 4-етоксициклогексил, 5Для приготування солей приєднання кислот карбоксициклогептил, 6-хлорциклогексил тощо можна використовувати такі неорганічні кислоти, Приклади заміщених здатних до гідролізу груп як пдрохлоридна, пдробромідна, пдроюдидна, включають N-бензилгліцил, N-Cbz-L-валіл і Nсульфурова тощо і такі органічні кислоти, як рметилнікотинат толуолсульфонова, метансульфонова, оксалінова, Сполуки згідно з винаходом мають щонаймер-бромфенілсульфонова, карбонова, бурштинова, нше п'ять асиметричних центрів, позначених * у лимонна, бензойна, оцтова тощо формулі (9) Прикладами фармацевтично прийнятних солей є сульфат, піросульфат, бісульфат, сульфіт, бісульфіт, фосфат, монопдрофосфат, дипдрофосфат, метафосфат, пірофосфат, хлорид, бромід, юдид, ацетат, пропюнат, деканоат, каприлат, ак 16 15 57772 рилат, формат, ізобцтират, капроат, гептаноат, сполученні з водою, ізопропанолом, етанолом, пропюнат, оксалат, малонат, сукцинат, суберат, метанолом, ДМСО, етилацетатом, оцтовою кислосебацат, фумарат, малеат, бутин-1,4-дюат, гексинтою або етаноламіном 1,6-дюат, бензоат, хлорбензоат, метилбензоат, Слід відзначити, що не має значення, який динітробензоат, гідрокс и бензоат, метокс и бензоат, протиюн утворює сольову частину сполуки згідно з фталат, сульфонат, ксилолсульфонат, фенілацевинаходом за умови, що така сіль у цілому є фартат, фенілпропюнат, фенілбутират, цитрат, лактат, мацевтичне прийнятною, а протиюн не вносит неg-пдроксибутират, гліколят, тартрат, метансульбажаних властивостей у цю сіль фонат, пропансульфонат, нафталш-1-сульфонат, Бажаною є сполука 21 нафталш-2-сульфонат, манделаттощо Н Бажаними фармацевтичне прийнятними солями приєднання кислот є утворені такими неорганічними кислотами, як пдрохлоридна і пдробромідна, і такими органічними кислотами, як малеїнова і метансульфонова Солі приєднання основ включають утворені такими органічними і неорганічними основами, як гідроксид амонію, лужних або лужноземельних металів, карбонати, бікарбонати тощо Бажаними тобто [3S-[2(2S*,3S*), 3-a, 4a-p, 8a-p]]-N-(1,1для приготування таких солей є такі основи, як диметил-2-пдроксіетил)декапдро-2-[2-пдрокси-3гідроксиди натрію, калію та амонію, карбонати та [(3-пдрокси-2-метилбензоіл)амшо]-4бікарбонати натрію і калію, гідроксид кальцію, кар(фенілтю)бутил]-3-ізохінолін-карбоксамід бонат кальцію тощо Найбільш бажаними є калієві Процедуру приготування сполуки 21 описано та натрієві солі нижче, и можна також отримати як метаболіт з "Фармацевтичне прийнятний пропрепарат" плазми пацієнта, якому була уведена [3Sозначає сполуку, яка за фізіологічних умов або (3R,4aR*,8aR*,2'S*,3'S*)]-2-[21-nflpoKCH-31сольволізом може бути перетворена у сполуку фенілтюметил-4'-аза-5'-оксо-5'-(2"-метил-3"формули (9) пдроксифент)пентил]-декапдроізохінолін-3-г\І-1:"Фармацевтичне прийнятний сольват" означає бутилкарбоксамідна сіль метансульфонової киссольват, який зберігає біологічну активність і власлоти, описана у патенті США 5484926 тивості біологічно активних компонентів сполук Сполуки формули (9) можна приготувати за формули (9) реакційною Схемою І Необмежуючими прикладами фармацевтичне прийнятних сольватів є сполуки формули (9) у Схема І. Загальна процедура приготування 96 і похідних. C NB O Hu l Н СООН 000Н Л II . ""'.WX "S »°яиий гідроліз • і опер. 1а V захист яміном > ft F C N опер, і б сполученім опар. 2 1Ь ІЦ * захисна аміногрупа £ зиягпі аміновоги М * ОН хлорспирт епоксидна послідовність закриття -вШн пиття CbiHN' A V r t * N L. I LH опер. 5 опер. 4 Me А е О І , 000 f амідне сполучення видалення ацетату fK> опер. 66 опар. 6а 91 9b 57772 18 17 Сполуку 1а (перпдроізохінолш), який можна Такі захисні групи звичайно встановлюють алпридбати у NSC Technologies (Чикаго, Ілл) або у кілюванням ВІДПОВІДНИХ галоген-форматних естеProcos SpA (Мілан, Італія) піддають тривалому рів 12а або дикарбонату 126 кислотному гідролізу (операція 1а) і одержують 0 О сполуку 2а Можна використати різні неорганічні кислоти у водно-органічному розчиннику або у воді гТО' ^Х R H O' "Y при температурі вище 50°С Прикладом такої кис12а 126 лотиє 6N водна НСІ Замісниками для сполуки 1а де Х-галоген, Y-OCOR", у присутності придатможуть бути ВІДПОВІДНІ естери 16, тюестери 1в або ної бази у органічному розчиннику, типовому для ІНШІ аміди 1г таких реакцій, наприклад галогенованих розчинниках, етерах і пдро-карбонах Бази звичайно є неорcooz _. c°sz ганічними, наприклад, гідроксиди металів, бікарбонати і карбонати, або органічними, наприклад, такі аміни, як тріетиламш, діетиламін, діетилізопропіламш, 1,8-діазабіцикло[2,2,2]октан (ДАБЦО) або ВІДПОВІДНІ ді- або тріалкіламіни, а також амідинові основи, наприклад, 1,816 1в 1г діазабіцикло[5,4,0]ундец-7-ин (ДБУ) і 1,8де Z, Z-i, Z2 незалежно можуть бути алкілом, діазабіцикло[4,3,0]нон-5-ш (ДБН) Наведені нижче циклоалкілом, гетероциклічною групою або ариматеріали можна придбати у Aldnch Chemical Co лом (Sigma Aldnch Fluka) Сполуку 2а захищають у азоті аміну і одержують сполуку 26 (операція 16) Захисна група Rp є ДДБЦО * ВІДПОВІДНОЮ спряженою групою, що дозволяє уникнути розкладу активованих карбоксилатних похіДБУ * дних сполуки 26 (операція 2) Такі захисні групи за походженням є звичайно карбаматними і мають формулу 11 ДБН * R-0 11 де R''-алкіл, циклоалкіл, арил або гетероцикл, які можна легко видалити депротектуванням після операції 2 Необмежуючими прикладами R" є метил, етил, пропіл, ізо-пропіл, п-бутил, ізобутил, tбутил або вищі розгалужені або нерозгалужені алкіл, 2,2,2-трихлоретил, 2-триметилсилілетил, аліл, феніл, заміщений феніл, бензил, заміщений бензил, 9-флуоренілметил, 9-антрилметил і вищі поліциклічні ароматичні кільцеві системи Матеріали, наведені нижче, можна придбати у Aldnch Chemical Co (Sigrna Aldnch Fluka) V 2,2,2-три хяорети я • — СНг-С-О С Н O+j 2-триметшісипіпетия r - C M j - G - S i - O + j ария і бензил • 9- флуорені я » Э-антрилметал — снг-см»снг Такі реакції звичайно проводять при температурах від кімнатної до 100°С Амідне сполучення (операція 2) можна здійснити у різні способи залежно від способу активування карбоксильної групи Операцією 2 (реакцією карбонової кислоти 26) встановлюється група J, що дає активовану похідну 2с Операція 2 CO OK н 26 2в З де Rp-захисна аміногрупа, J-будь-яка група, здатна до відщеплення, наприклад, алкоксильна, гідроксильна, галогене-, псевдогалогено- (включаючи азидну, ціанідну, ізоціанатну і ізоціанатну групи), алкільна або аренсульфонатна, ароматична гетероциклічна (з зв'язком через гетероатом) і N-пдроксигетероциклічна група (включаючи пдроксисукцинімідний або пдроксибензотріазоловий естер) Нижче наведено деякі визначення 57772 19 азид ціанід ізоціанат ізотіоціават —ON — N«00 алкілсульфонат 0 й — О - S - алкіл 0 аренсуяьфонат 0 н —-&-&— алил 9 0 N -гїдроксигетероцикл азотний гетероцикл Н-гїдроксисукцинімід HO- N о ПОВІДНИЙ гщроксибензотріазол ОМ Ацилгалогени (2в, J-галоген) можна приготувати, використовуючи такі неорганічні галогенуючі агенти, як тюнілхлорид або бромід, фосфорний трихлорид або бромід, фосфорний пентахлорид або бромід, або органічні агенти, наприклад, оксалілхлорид або трихлорізоціанурова кислота Естери (2в, J-OR") можна приготувати у різні способи, починаючи з сполучення хлорангідриду 2в, де JСІ, з бажаним спиртом у присутності органічної або неорганічної основи, подібної використаній при ацилюванні сполуки 12а або 126 Естер можна також приготувати кислотним естерифікуванням у присутності бажаного спирту Сульфонати (2в, JOSO2W1, де Wi-алкіл або арил) звичайно готують уведенням карбонової кислоти 26 у реакцію з алкілом або арилсульфонілхлоридами у присутності органічної амінової основи, наприклад, тріетиламіну у неполярному розчиннику при температурі нижче 0°С Алкіл І арилсульфоніл визначено як О аякіяеульфонілхлорид 20 основи, наприклад, 1,8-діазабіцикло[5,4,0]ундец-7ин (ДБУ) і 1,8-діазабіцикло[4,3,0]нон-5-ш (ДБН) Бажаною базою є тріетиламш Гетероароматичні ПОХІДНІ 2в також одержують з галогенанпдридів 2в (J-галоген), використовуючи специфічну гетероароматичну сполуку у присутності амінової основи у неполярному розчиннику Nпдроксигетероциклічні ПОХІДНІ 2в можна виготовити з галогенанпдридів, як описано вище, а також алкілкарбодимідів (апкіл-М=С=І\І-алкіл) з однаковими або різними алкільними групами, або з арилкарбодммідів (арил-М=С=І\І-арил) з однаковими або різними арильними групами, з використанням амінової основи як конденсуючого агента Первинні або вторинні аміни (див над стрілками операції 2 Схеми 1), які використовуються у процесі сполучення, можуть включати придатні захисні групи залежно від функціональності аміну і способу сполучення Сполучення 2в з первинним або вторинним аміном може бути виконано за різними процедурами залежно від J Якщо використовується вільна кислота (2в, J-OH) сполучення здійснюють за допомогою карбодмміду, використовуючи будь-який з звичайних реагентів цього класу, включаючи дициклогексилкарбодммід або ВІД -$>—алкш діалкілкарбодммід, арєнсул ьфокі лхяорид * о О 2г 12г де Х-галоген Такі естери є типовими і, як показано у 12г, включають метил-, етил-, ізопропіл-, ізобутил-, пбутил-, феніл-1 ВІДПОВІДНІ алкіл-та арилформати О апкілхлорфармат алкіл Q• я -S— арил 6 Псевдогалогенні ПОХІДНІ 2В (J-псевдогалоген) звичайно одержують з галоге-нанпдриду 2в (Jгалоген) реакцією з неорганічним псевдогалогеном у присутності основи Необмежуючими прикладами таких основ є гідроксиди металів, бікарбонати і карбонати, або органічні основи, наприклад, такі аміни, як тріетиламш, діетиламін, діетилізопропіламін, 1,8-діазабіцикло[2,2,2]октан (ДАБЦО) або ВІДПОВІДНІ ді- або тріалкіламіни, а також аміди нові 1-(3 Галогенформатні естери, наприклад, 12г, можна використати для тимчасового активування кислоти і одержання змішаних ангідридів загальної формули 2г її О солі диметиламшопропіл)-3-етилкарбодиміду (ДМЕК) або ВІДПОВІДНІ водорозчинні реагенти, разом з органічною аміновою основою у полярних органічних розчинниках, наприклад, діоксані, ДМФ, Nметилпіролідоні і ацетонітрилі у присутності Nпдрогетероциклічної сполуки, наприклад, Nпдроксисукциніміду або 3-пдроксибензотріазолу о арилхлорформат сАа арилСполука формули 12г може бути штермедіатом у операції переходу від формули 26 до формули З Ці реакції звичайно проводять у різних неполярних органічних розчинниках, наприклад, утаких галогенокарбонах і етерах, як діетиловий етер, метил-1:-бутиловий етер, дмзопропіловий етер, дю 22 21 57772 ксан і ТГФ при температурах нижче 0°С у присутВиробником сполуки 5 є Kaneka Industries, ності органічної амінової основи, наприклад, тріеJapan Для перетворення "сполука 5-сполука 13тиламшу, діетиламіну, діетилізопропіла-мшу, ДАсполука 6" можна кілька разів використати процеБЦО або ВІДПОВІДНИХ ді- або тріалкіламшів, або дуру закриття-відкриття Епоксид 13 можна ізолюамідинової основи, наприклад, ДБУ та ДБН вати або увести у реакцію з 4, доданою після утворення сполуки 13, або 4 може бути присутЯкщо у сполуці 2в J-галоген або псевдогалоньою з самого початку Епоксид 13 можна створюген, сполучення можна проводити у звичайних вати, використовуючи неорганічні основи, наприорганічних розчинниках, наприклад, ТГФ, діетилеклад, гідроксиди металів, карбонати і бікарбонати тері, діоксані, метил^-бутиловому естери або іну таких розчинниках, як спирти, наприклад, меташих естерах, ацетоні, циклогексаноні, метилізобунол, етанол або ізопропіловий спорт, або етери, тилкетоні і інших кетонах, у естерах, наприклад, наприклад, ТГФ і діоксан або їх суміші Епоксид етиловому, метиловому і ізопропілацетатному може утворюватись у двофазній системі розчинни(ІПА), у галогенованих розчинниках, наприклад, ків, складеної з води і розчину галоген карбону, галогенованих метанах і етанах, хлорбензолі і іннаприклад, ДХМ разом з основою Для прискоренших галогенованих бензолах, у нітрилах, наприня процесу можна використати каталізатор фазоклад, ацетонітрилі і пропюннітрилі, у нижчих спирвого переходу, наприклад, сіль тетраалкіламонію тах, наприклад, етанолі, ізопропанолі, t-бутанолі і Відкриття епоксиду 13 з сполукою 4 відбувається у ВІДПОВІДНИХ спиртах, у полярних органічних розспиртових розчинах або у сумішах спирту і іншого чинниках, наприклад, ДМФ, ДМСО, ІЧ-метил-2розчинника-етеру або диполярного апротонного піролідоні і ВІДПОВІДНИХ амідовмісних розчинниках розчинника, наприклад, ДМФ або ДМСО Цю реакЧасто використовують основу, яка може бути цію з сполукою 4, яка дає сполуку 6, найкраще будь-якою неорганічною основою, наприклад, гідпроводити протягом 2-7год при температурі 50роксидами металів, бікарбонатами і карбонатами, 60°С а також органічною основою, наприклад, тріетиламіном, діетиламіном, діетилізопропіламіном, ДАБОперацією 5 карбобензилоксильна група виЦО або ВІДПОВІДНИМИ ді- або тріалкіламшами, або даляється з утворенням вільного аміну 7 Це здійамідиновою основою, наприклад, ДБУ та ДБН снюється використанням НВг у оцтовій кислоті з співрозчинниками, наприклад, галогенокарбонами, Фахівець зможе здійснити амідне сполучення або використанням галогенідів бору, наприклад, (операція 2), використовуючи ІНШІ групи J ВВгз і ВСІз або галогенідів бору, заміщених алкіВидалення захисних груп (операція 3) можна лом, наприклад, броміду диметилбору у галогеноздійснити, використовуючи стандартні методи декарбонових розчинниках, наприклад, хлороформі протектування цього класу захисних груп Прості і або ДХМ при температурах від 0°С до кімнатної У заміщені алкіл карбам ати можна видалити водіншому варіанті карбобензилоксильну групу можна ним розчином основи при температурі до прибливидалити гідролізом з використанням воднозно 100°С, використовуючи будь-який з звичайних спиртових розчинів гідроксидів таких металів, як неорганічних гідроксидів металів, наприклад, гідбарій, натрій, ЛІТІЙ або калій, при температурі вироксиду ЛІТІЮ, натрію, калію або барію, або інших ще кімнатної протягом кількох год металів у щонайменше стехіометричній КІЛЬКОСТІ Для депротектування карбаматів на базі бензилу Сполучення похідних бензойної кислоти форможна використовувати безводні кислоти, напримули 8 (операція ба) дає сполуку 9а У формулі 8 клад, НСІ, НВг і HJ Придатними є також кислоти Q може бути здатною до відщеплення групою, зокЛьюіса з бором та алюмінієм, включаючи АІСІз, рема, однією з груп, згаданих при розгляді групи J ВВгз, ВСІз у неполярному розчиннику Можна виСполуки формули 8, у яких Q-OH або СІ, можна користовувати також певні заміщені бензильні, придбати у EMS Dotticon, Ленцбург, Швейцарія та арильні або алкільні групи, якщо спосіб заміщення Sugai Chemical Industries, Ltd, Японія Сполучення задовольняє вимозі бути здатними до видалення можна здійснити у багато способів залежно від Q за певних умов Наприклад, 2'При використання вільної кислоти (Q-OH) сполутриметилсилілетилкарбонільна група є захисною чення можна здійснити, використовуючи базовані групою, призначеною легко реагувати з 2на карбодмміді способи з застосуванням будьтриметилсилілетиловою групою у процесі депроякого з звичайних реагентів цього класу, включаютектування Азот аміну можна захистити 2чи дициклогексилкарбодіїмід або ВІДПОВІДНІ діалкітриметилсилілетилкарбоніл- хлоридом, який потім лкарбодиміди, солі 1-(3-диметиламінопропіл)-3можна видалити за допомогою джерела юну фтоетилкарбодмміду, або ВІДПОВІДНІ водорозчинні реару, наприклад, HF або фториду тетраалкіламонію генти, разом з органічною аміновою основою у полярних органічних розчинниках, наприклад, діоОперацією 4 перпдроізохінолшова частина ксані, ДМФ, N-метилпіролІДОНІ і ацетонітрилі у формули 4 з'єднуються хлорспиртом (сполука 5 присутності N-пдрогетероциклічноі сполуки, наСхеми І) через епоксидний штермедіат (13), утвоприклад, N-пдроксисукциніміду або 3рений викликаним основою закриттям віцинової пдроксибензотріазолу Якщо Q-галоген або псевхлорпдринової функціональної групи догалоген, сполучення можна здійснювати у звичайних органічних розчинниках, наприклад, ТГФ, SPh діетиловому, діоксані, метило-бутило во му етері або інших етерах, ацетоні, циклогексаноні, метилізобутилкетоні і інших кетонах, естерах, наприCbzHN клад, етил-, метил- і ізопропіла-цетаті, у галогенованих розчинниках, наприклад, галогенованих 13 23 57772 метанах і етанах, у хлорбензолі і інших галогенованих бензолах, у нітрилах, наприклад, ацетонітрилі і пропюнггрилі, у нижчих спиртах, наприклад, етанолі, ізопропанолі, t-бутанолі і ВІДПОВІДНИХ спиртах, і у полярних органічних розчинниках, наприклад, ДМФ, ДМСО, І\І-метил-2-піролідоні і ВІДПОВІДНИХ амідовмісних розчинниках Можна використати основи, а саме, будь-яку з неорганічних основ, наприклад, гідроксиди металів, карбонати і бікарбонати, або такі органічні основи, як аміни, наприклад, тріетиламш, діетиламін, діетилізопропіламін, ДАБЦО або ВІДПОВІДНІ ДІ- або тріалкіламіни, або аміди-нові основи, наприклад, ДБУ та ДБН 24 Видалення ацетату (операція 66) здійснюється водними або спиртовими розчинами неорганічних основ, наприклад, гідроксидів металів, карбонатів та бікарбонатів при температурах від кімнатної до 100°С Якщо карбоксамідну групу, з'єднану з перпдроізохшоліновою кільцевою системою, захищена функціональною групою, її найкраще видаляти на цій стадії (під час або після операції 66) Природа цієї операції залежить від виду захисної групи Бажаний спосіб здійснення процесу за Схемою 1 наведено на Схемі II Схема II Синтез аміду 21 CCNI+fti онер. Г потім 50%-й водний НвОН опер.Е Амінокислота 15, захищена групою Cbz, була сполучена з аміном 22 з утворенням аміду 16 Видалення групи Cbz пдрогенуванням дає амін 17, який сполучається з хлорспиртом через епоксид з утворенням аддукту 18 Звичайне депротектування основою і з'єднання вільного первинного аміну з хлорним ангідридом 20 дає амід 21 Цей процес детально ілюстровано прикладами 1А-Е (відповідають до операціям А-Е) Подальші приклади ілюструють винахід, не обмежуючи його об'єму Абревіатури Т п- точка плавлення, ЯМР - спектр ядерно-магнітного резонансу, МСУЕ - мас-спектр з збудженням ударом електронів, МСПД - мас-спектр з польовою десорбцією, СБША - спектр бомбардування швидкими атомами, ІЧ - інфрачервоний спектр, УФ - ультрафіолетовий спектр, Аналіз - елементний аналіз, ВЕРХ - високоефективна рідинна хроматографія, ТШХ - тонкошарова хроматографія У ІЧ відзначено не усі максимуми абсорбції, а лише важливі Для ЯМР використано абревіатури s-синглет, d-дублет, dd-дублет дублетів, tтриплет, q-квартет, т-мультиплет, dm-дублет мультиплетів, br s-широкий синглет, br d-широкий дублет, brt-широкий триплет, br m-широкий мультиплет J-сполучаюча константа Якщо не зумовлено інше, ЯМР відноситься до вільної бази або сполуки, що синтезується ЯМР одержано на приладі General Electric QE300, 300МГц ХІМІЧНІ зсуви наведено у значеннях 5 (1/млн) Масові спектри одержані на приладі VG ZAB-3 Spectrometer у Scnpps Research Institute, La Jolla, CA ІЧ зареєстровано спектрометром Midac Corporation УВ зареєстровано на приладі Vanan Сагу ЗЕ ТШР виконано з використанням пластин оксиду кремнію від Е Merck T п виміряно на приладі Mettler FP62 без коригування Приклад 1 Амід формули 21 [3S-[2(2S*,3S*), 3-а, 4а-р, 8а-р]]-ІЧ-(1,1-Диметил-2пдроксіетил)декапдро-2-[2-пдрокси-3-[(3-пдрокси2-метилбензоіл)аміно]-4-(фенілтю)бутил]-3ізохшолшкарбоксамід, тобто 25 Me О Г n 57772 x НО. t A 26,4r (111 ммоль) перпдрохінолшу (від NSC Technologies (Чікаго, Ілл) або від Procos SpA, Мілан) суспендують у 200мл води і концентрують водною НСІ (200мл) Суміш гріють з перемішуванням під зворотним холодильником протягом 3 днів, після чого вона перетворюється у розчин Розчинники видаляють під зниженим тиском і одержують світложовту тверду речовину, яку суспендують у 200мл 2-пропанолу і фільтрують Фільтрат піддають випарюванню під зниженим тиском і одержують масло Додають ЮОмл ЕЮАс і ЮОмл води і доводять рН до 8 доданням 2N водного КОН Краплями протягом Юхвил додають 15,8мл (111 ммоль) бензилхлорформату і підтримують рН від 7 до 8 доданням 2N водного КОН Суміш перемішують при кімнатній температурі протягом 18год , після чого додають 200мл ЕЮАс і промивають органічний шар 1N водною НСІ (ЮОмл) і розсолом (ЮОмл) Органічний шар сушать (MgSO4), фільтрують і піддають випарюванню під зниженим тиском до одержання масла Продукт очищують хроматографією на колонці силікагелю з елюентом петролейний етер (40-60)/ЕЮАс (1 1), потім 100% ЕЮАс Фракції, що містять продукт, збирають і піддають випарюванню під зниженим тиском, одержуючи 11,3г (32%) сполуки 15 у вигляді безбарвного масла 1 Н ЯМР (300МГц, CDCI 3 ) 5 7,43-7,28 (m,5H), 5,17 (brs, 2H), 4,76 (m, 1H), 3,79 (m, 1H), 3,33 (m, 1Н), 2,19 (m, 1H), 1,96 (m, 1H), 1,88-1,15 (m, ЮН) Б 4,2г (31,4 ммоль) 1-пдроксибензотраізолу і 6,0г (31,4 ммоль) 1-(3-диметиламінопропіл)-3етилкарбодмміду додають розчину 8,3г (26,2 ммоль) кислоти 15 у 128мл ДМФ при кімнатній температурі Суміш гріють при 80°С протягом Юхвил Додають 5,1г (31,4 ммоль) 1,1-диметил-2триметилсилілоксіетиламшу, приготовленого з 1,1диметил-2-пдроксіетиламшу (Aldnch Chemical and C o ) і гексаметилдиси-лазану (Aldnch Chemical and C o ) підігріванням суміші під зворотним холодильником протягом кількох год , з подальшим випаровуванням летких компонентів, і розчин гріють при 80°С протягом 17год Жовтий розчин вливають у 250мл ЕЮАс і 250мл 2N водної НСІ Після 10хвилинного перемішування додають 750мл ЕЮАс і суміш промивають водою НСІ (Зх500мл) і розсолом (250мл) Об'єднані водні шари екстрагують ЕЮАс (250мл) і об'єднані органічні шари сушать (MgSO4) і очищують флеш-хроматографією (ЕЮАс/гексани (50 50), одержуючи 7,9г (78%) сполуки 16 у вигляді безбарвного масла 1 Н ЯМР (300МГц, CD 3 OD) 5 7,36 (m, 5H), 5,20 (d, J=8, 1 Гц, 1Н), 5,10 (m, 1H), 4,53 (m, 1H), 3,78 (dd, J=13,2, 4,4Гц, 1Н), 3,60 (m, 2H), 3,48 (d, J=10,7l~4, 1H), 2,15-1,25 (m, 12H), 1,31 (s, ЗН), 1,29 (s, ЗН) В Суміш 7,9г (20,4 ммоль) карбамату 16 і 5% паладію на карбоні (Pd/C) (1,6г) пдрогенують при 26 345кПа (50 фунтів/кв дюйм) при кімнатній температурі протягом 18 год Суміш фільтрують через Cehte і піддають випарюванню у вакуумі, одержуючи амін 17 у вигляді білої кристалічної твердої речовини 1 Н ЯМР (300МГц, CD 3 OD) 5 3,63 (q, J=7,0l~4, 2Н), 3,34 (m, 1Н), 3,27 (dd, J=11, 8Гц, 3,3Гц, 1Н), 2,91 (m, 1Н), 2,02-1,15 (m, 12Н), 1,32 (s, ЗН), 1,31 (s, ЗН) Г 2,4мл (24,5 ммоль) 10 2N водного NaOH з механічним перемішуванням додають до теплої (27°С) суспензії 10,4г (24,5 ммоль) хлорспирту (від Kaneka Industries, Японія) у 104мл ізопропанолу Через 1 год для нейтралізації (рН=7) додають приблизно 1мл 1N водної НСІ у ізопропанолі (приготовленої доданням 1мл концентрованої водної HCL до 12мл ізопропанолу), потім додають розчин 5,2г (20,4 ммоль) аміну 17 у 50мл ізопропанолу, суспензію гріють при 60°С протягом Югод і ізопропанол видаляють у вакуумі Залишок розводять ЕЮАс (150мл) і промивають водою (2х50мл), насиченим водним МаНСОз (50мл) і розсолом (50мл) Об'єднані водні шари екстрагують ЕЮАс (25мл) і об'єднані органічні шари сушать (MgSO4) і очищують флеш-хроматографією (ЕЮАс /гексани (75 25), одержуючи 8,98г (76%) сполуки 18 у вигляді білої твердої речовини 1 Н ЯМР (300МГц, CD3OD) 5 7,33 (m, ЮН), (АВ, иАВ=12,2Гц, ди АВ =12,1Гц, 2Н), 3,96 ( т , 3,56(q, и=7,ЗГц, 2Н), 3,50 ( т , 1Н), 3,20 J=13,6f4, 9,2Гц, 1Н), 3,03 ( т , 1Н), 2,64 ( т , 2,20-1,20 ( т , 14Н), 1,28 (s, 6H) 5,08 2Н), (dd, 2Н), Д 2,7г (1,8мл, 33,6 ммоль) 50%-го водного NaOH додають до суспензії 6,75г (11,6 ммоль) карбамату у 34мл ізопропанолу при кімнатній температурі, після чого суміш гріють під зворотним холодильником протягом 12 год Після охолодження до кімнатної температури суміш розводять метилЬбутиловим етером (600мл) і промивають водою (2х250мл) і розсолом (125мл) Об'єднані водні шари екстрагують метил-1:-бутиловим етером 150мл) і об'єднані органічні шари сушать (MgSO4) і піддають випарюванню у вакуумі, одержуючи суміш сполуки 19 і бензилового спирту у вигляді білої маслянистої твердої речовини 1 Н ЯМР (300МГц, CD3OD) 5 7,34 (m, ЮН), 4,63 (s, 2H), 3,81 (m, 1H), 3,58 (m, ЗН), 3,03-3,60 (m, 5H), 2,17 (m, 1H), 2,05 (m, 1H), 1,87-1,05 (m, 12Н), 1,30 (s, ЗН), 1,28 (s, ЗН) E 3,2мл (4,3мл, 31,2 ммоль) тріетиламіну додають до розчину суміші 4,7г (10,4 ммоль) аміну 19 і 23мл бензилового спирту у 23мл ЕЮН при кімнатній температурі Додають розчин 2,4г (11,5 ммоль) З-ацетокси-2-метилбензоілхлориду 20 (приготовленого за процедурою, наведеною у заявці 08/708 411 від 5 091996 на патент США, включеній сюди посиланням) у 4мл ТГФ Через дві години додають 4,1г (2,8мл, 52,2 ммоль) 50%-го водного NaOH і суміш гріють під зворотним холодильником протягом 1год і після охолодження до кімнатної температури нейтралізують до рН=7 водною НСІ (2N, 26мл) Далі суміш розводять ЕЮАс (500мл) і промивають водою (250мл), насиченим водним NaHCO3 (2х250мл), водою (250мл) і розсолом (125мл) Органічний шар сушать (MgSO4) і очищують флеш-хроматографією 27 57772 (ЕЮАс/гексани (75 25), одержуючи 1,39г (23%) аміну 21 (1173-57А) у вигляді білої піни Результати 1Н ЯМР вказують на присутність 11% (масових) ЕЮН, які не можуть бути видалені у вакуумі Аналіз 1 Н ЯМР (300МГц, CD3OD) 5 7,53 (d, J=7,3I~4, 2Н), 7,32 (t, J=7,0l~4, 2H), 7,20 (t, J=7,3I~4, 1H), 7,06 (t, J=8,1I~4, 1H), 6,92 (d, J=8,1I~4, 1H), 6,83 (d, J=8,1T4, 1H), 4,42 (m, 1H), 4,08 (m, 1H), 3,61 (dd, J=13,6, 4,0Гц, 1H), 3,45 (AB, ди АВ =11,0Гц, ДІІААВ=18,0ГЦ, 2Н), 3,29 (dd, J=13,6, 10 3Гц, 1Н), 3,10 (m, 1H), 2,66 (m, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,22 (m, 2H), 2,04 (m, 1H), 1,86-1,20 (m, 11H), 1,19 (s, 3H), 1,18 (s, 3H) 13 C ЯМР (75,5МГц, CD3OD) 5 175,7, 172,5, 155,9, 138,8, 136,7, 129,8, 128,9, 126,3, 126,0, 122,4, 118,4, 115,9, 70,3, 69,9, 68,2, 59,3, 58,8, 59,4, 53,0, 36,5, 34,2, 34,1, 31,1, 30,7, 26,4, 23,1, 23,0, 20,8, 12,1 Приклад 2 Здатність до інгібування протеази ВІЛ і анти-ВІЛ дія сполуки 21 у КЛІТИННІЙ культурі Для визначення значень К, для сполуки 21 був використаний аналіз кінетики тісного зв'язування К,=5,6±0,91нМ Способи Експресія протеази ВІЛ-1 Ген протеази ВІЛ-1 був ізольований з вірусного штамму 111В (Ratner L, et al , Nature, 316, 227284, 1985) Для підвищення стабільності очищеної протеази (Rose J R Et al , J Biol Chem , 268, 11939-11945, 1993) глютаміновий залишок у поз 7 (Q7) був мутований у серин (S) заміщенням сегмента 33 базових пар між сайтами Ndel та BstEII генної ПОСЛІДОВНОСТІ протеази синтетичними олігонуклеотидами, які кодують мутацію Q7S Модифікована генна ПОСЛІДОВНІСТЬ була уведена у плазмідний вектор pGZ (Menge К L Et al , Biochemistry, 34 15934-15942, 1995) під контролем промотора фагу Т7 Одержаний таким чином констракт pGZ/HP-19Q7S#9 був трансформований у штамм Е coli BL21(DE3), придбаний у Novagen, Inc Експресія протеази ВІЛ Культуру вирощували у середовищі 2YT (1,6% пептону триптикази, 1% дріжджового екстракту, 0,5% NaCI при початковому рН=7,5), яке містило 200мкг/л ампіциліну, у 100літровому ферментері (Biolafitte SA) при 37°С протягом 5год , після чого індукували доданням 1мМ ізопропіл-р-О-тюгалактопіранозиду Температуру культури під час індукування підвищували до 42°С для прискорення акумуляції рекомбінантної протеази ВІЛ-1 у вигляді нерозчинних включених тілець Після 2-ГОДИННОГО витримування при 42°С клітини були зібрані поперечно-потоковим фільтруванням з використанням касети Pehcon 0,1 мкм WPP000C5 (Milhpore) і клітинну пасту заморожували до -70°С для зберігання Очищення рекомбінантної протеази ВІЛ-1 Усі операції проводились (якщо не зумовлено інше) при 4°С Концентрації протеїну визначали з використанням розчину BioRad для аналізів на протеїн з альбуміном бичачої сироватки (BioRad, Richmond, CA) Хроматографію і аналіз чистоти протеази ВІЛ виконували електрофорезом у поліакриламідному гелі додецилсульфату натрію (SDS-PAGE) Кінцева чистота протеази ВІЛ >98%, 28 кінцевий вихід з кожних 100л культури-приблизно 120мг Клітинну пасту з 100л культури ресуспендували у ЗООмл лізисного буфера (50мМ трис-СІ рН 8,0, 25мМ NaCI, 20мМ 2-меркаптоетанолу) мікропсевдозріджували у псевдозріджувачі Microfluidics Corporation при 152000кПа (22000 фунтів/кв дюйм) Сирий клітинний лізат освітлювали центрифугуванням при 14000об /хвил, протягом 20хвил Протеазу ВІЛ було виявлено переважно у гранулах у вигляді включених тілець, які були піддані багаторазовому промиванню лізисним буфером, до якого було додано 0,1% Tntion-X100 і 1М мочевини Після промивання включені тільця були піддані 20-хвилинному центрифугуванню при 9000об /хвил для утворення гранул Очищені включені тільця були солюбілізовані у буфері з вмістом 50 мМ трис-СІ рН 8,0, 25 мМ NaCI, 20мМ 2-меркаптоетанолу і 8М мочевини Розчин освітлили центрифугуванням при 14000об/хвил і при кімнатній температурі ввели у ЗООмл колонку Fast Flow Q-Separose (Pharmacia, Piscataway, NJ) з урівноваженням тим же буфером За цих умов протеаза ВІЛ не зв'язувалась з колонкою і з проточних фракцій був одержаний суттєво чистий фермент Для ренатурацм протеша фракції з колонки Fast Flow Q-Separose були діалізовані трьома змінами буфера з вмістом 25мМ NaH2P04 рН 7,0, 25мМ NaCI, ЮмМ дитютреїтолу і 10% гліцеролу Після повторного згортання ДНК центрифугуванням були відділені невеликі КІЛЬКОСТІ осадженого матеріалу і одержані препарати фермента були концентровані, діалізовані сумішшю 0,5М NaCI, 50мМ MES рН 5,6 і ЮмМ дитютреїтолу і у малих аліквотах (приблизно 2мг/мл) заморожені для зберігання при -70°С Аналіз кінетики тісного зв'язування Протеолітична активність очищеної протеази ВІЛ-1 була виміряна за допомогою модифікованого хромогенного аналізу, запропонованого Ричардсомташ (Richards A D Et al , J Biol Chem , 256, 773-7736, 1990) Як субстрат був використаний синтетичний пептид His-Lys-Ala-Arg-Val-LeuPhe(paraNO2)-Glu-Ala-Nle-Ser-NH2 (American Peptide Company) (Nle-норлейцин) Аналіз був виконаний у буфері 0,5М NaCI, 50мМ MES рН 5,6, ЮмМ дитютреїтолу і 2% ДМСО при 37°С Розщеплення однониткового зв'язку між лейцином і паранітрофенілаланіном (Phe para-NO2) було виявлено спектрофотометрією зменшення поглинання на 305нм Початкову швидкість визначали як швидкість зменшення поглинання протягом перших 100с ферментної реакції За цих умов, з використанням протеази ВІЛ-1 Q7S константа Майклза (Km) для цього субстрату становила 59±17мкМ Для визначення інгібування сполукою 21 був використаний субстрат концентрації 200мкМ Між 13 і 20 оцінювали концентрації інгібіторів і обчислювали швидкість реакції для кожної концентрації, як описано вище Дійсне значення К,, наведене раніше, було визначене комп'ютерною нелінійною апроксимацією даних рівнянням Морисона з використанням метода найменших квадратів (Morrison J F , Biochem Biophys Acta, 185,269-286, 1963) Приклад 3 Антивірусна дія сполуки 21 на ВІЛ1 у КЛІТИННІЙ культурі 29 57772 Штами клітин і вірусів Штами CEM-SS та МТ-2 Т-клітин людини і штами RF та МІВ ВІЛ-1 були одержані від AIDS Research and Reference Program, Division of AIDS, NIAIDand NIH Аналіз захисту клітин Інгібуючу дію кожного з агентів на реплікацію ВІЛ-1 виміряли методом редукції забарвлення МТТ (Alley m С Et al , Cancer Res , 48, 589-601, 1988) Сполуки були розчинені у ДМСО з концентрацією 40 мг/мл, потім розведені у пропорції 1 200 у середовищі культури (RPMI, з доданням 10% бичачої ембріональної сироватки) Від кожного розведеного зразка по ЮОмкл були розміщені на 96-ГНІЗДОВІЙ платі і була приготовлена напівлогарифмична ПОСЛІДОВНІСТЬ розведень У окремих пробирках клітини МТ-2 і клітини CEM-SS були інфіковані ВІЛ-1 МІВ і ВІЛ-1 RF з множинністю інфікування 0,01 та 0,03 ВІДПОВІДНО Після 4годинного періоду адсорбції до гнізд пластини з ліками були внесені по ЮОмкл інфікованих або ЗО неінфікованих клітин, чим була створена кінцева концентрація 104 КЛІТИН/ГНІЗДО Через 6 (клітини CEM-SS) або 7 (клітини МТ-2) днів до випробувальних пластин було додано МТТ (5мг/мл) і КІЛЬКІСТЬ утвореного формазану була виміряна квантифікованою спектрофотометрією на 570нм Дані були репрезентовані у процентах формазану, утвореного у оброблених ліками гніздах, порівняно з КІЛЬКІСТЮ формазану, утвореного у гніздах, вільних від ЛІКІВ ЕДбо обчислювали як концентрацію ЛІКІВ, яка підвищувала продукування (у %) формазану у інфікованих гніздах з ліками на 50% порівняно з цим показником у неінфікованих вільних від ЛІКІВ гніздах Цитотоксичність (ЦТ50) обчислювали як концентрацію ЛІКІВ, яка знижувала продукування (у %) формазану у неінфікованих гніздах з ліками на 50% порівняно з цим показником у неінфікованих вільних від ЛІКІВ гніздах Терапевтичний індекс (ТІ) обчислювали діленням цитотоксичності (ЦТ50) на антивірусну ефективність (ЕД50) ТАБЛИЦЯ 1 Оцінки антивірусної активності і цитотоксичності сполуки 21 у клітинах CEM-SS, сильно інфікованих ВІЛ-1 RF Сполука 21 азидофімідин дидеоксицитидин ЕД50 (нМ) 34,2 52,3 94,70 ЕД50 (нМ) 154,1 543,1 142,0 ЕД50 (мкМ) 96,6 >374,5 37,69 ТІ 2825 >7161 398 ТАБЛИЦЯ 2 Оцінки антивірусної активності і цитотоксичності сполуки 21 у клітинах МТ-2, сильно інфікованих ВІЛ-1 ІІІВ Сполука 21 азидофімідин дидеоксицитидин ЕД50 (нМ) 85,6 430,7 5924 Як уже відзначалось, сполуки згідно з винаходом можна використовувати для інгібування протеази ВІЛ, пов'язаної з продукуванням і складанням вірусного компонента Втіленням винаходу є спосіб лікування інфекції ВІЛ, який полягає у введенні носію інфекції або пацієнту, наприклад, примату ефективної КІЛЬКОСТІ сполуки (9) або и фармацевтичне прийнятної солі Іншим втіленням винаходу є спосіб лікування СНІД, який полягає у введенні носію або пацієнту, наприклад, примату ефективної КІЛЬКОСТІ сполуки (9) або и фармацевтично прийнятної солі Ще одним втіленням винаходу є спосіб лікування інфекції ВІЛ, який полягає у введенні носію або пацієнту, наприклад, примату, інфікованому ВІЛ, ефективної КІЛЬКОСТІ сполуки (1) або її фармацевтично прийнятної солі Термін "ефективна КІЛЬКІСТЬ" означає таку КІЛЬКІСТЬ сполуки формули (9) або її фармацевтично прийнятної солі, яка ефективно інгібує пов'язані з протеазою ВІЛ продукування і складання вірусного компонента Конкретна доза сполуки, яка згідно з винаходом підлягає уведенню для отримання терапевтичного ефекту, залежить від конкретних ЕД50 (нМ) ЕД50 (мкМ) 92,6 109,4 176,3 ТІ 1082 254 ЗО обставин, пов'язаних з захворюванням, наприклад, від типу сполуки, що підлягає уведенню, і індивідуальних особливостей носія або пацієнта Денна доза для уведення за один раз або частинами може містити сполуку згідно з винаходом у КІЛЬКОСТІ приблизно від 0,01мг до приблизно 50мг на кг маси тіла, бажано приблизно від 0,05мг/кгдо приблизно 40мг/кг, найкраще приблизно від 1,0мг/кг до приблизно 30мг/кг Сполуки згідно з винаходом можна уводити різними шляхами, включаючи оральне, ректальне, черезшкірне, підшкірне, внутрішньовенне, внутрішньом'язове і через-носове уведення Сполуки згідно з винаходом бажано уводити у формі композицій Таким чином, ще одним втіленням винаходу є фармацевтична композиция або суміш, яка містить ефективну КІЛЬКІСТЬ сполуки формули (9) або и фармацевтично прийнятну сіль разом з фармацевтично прийнятним носієм, наприклад, розріджувачем або наповнювачем Бажано, щоб активний інгредієнт складав від 0,01% до 99,9% (за масою) композиції "Фармацевтично прийнятний" означає, що носій, наприклад, розріджувач або 32 31 57772 наповнювач сумісні з іншими інгредієнтами компоКомпозиція 4 зиції і не завдає шкоди пацієнту або носію інфекції Таблетка, яка містить Фармацевтичні композиції з сполуками згідно з винаходом можуть бути приготовлені за допомоАктивний інгредієнт 60мг на таблетку гою відомих процедур і з використанням загальноКрохмаль 45мг на таблетку доступних інгредієнтів У процесі приготування Целюлоза мікрокристаліч35мг на таблетку композицій згідно з винаходом до активного інгрена дієнта домішують носій, або розріджують його ноПолівшілпіролідон (10%-й 4мг на таблетку сієм, або розміщують його у носи, який може мати розчин у воді форму капсули, саше, паперу або іншого придатНатрійкарбоксиметиловий 4,5мг на таблетку ного контейнера Якщо носій слугує як розріджукрохмаль вач, він може являти собою твердий, напівтвердий Стеарат магнію 0,5мг на таблетку або рідкий матеріал, який виконує функцію розріТальк 1мг на таблетку джувача або середовища для активного інгредієнУсього 150мг та Отже, композиція може мати форму таблетки, пастилки, саше, облатки, еліксиру, суспензії, емуАктивний інгредієнт, крохмаль і целюлозу прольсії, розчину, сиропу, аерозоля (твердого або у сіюють через сито, меш №45 (США) і ретельно рідкому середовищі), мазі (з вмістом активного перемішують Водний розчин полівшілпіролідону інгредієнта до 10%), м'якої або твердої желатинозмішують з цим порошком і суміш пропускають вої капсули, супозиторія, стерильного розчину для через сито, меш №14 (США) Одержані таким чиІН'ЄКЦІЙ, пакетованого стерильного порошку тощо ном гранули сушать при 50°С і пропускають через Далі наведено приклади композицій, які ілюстсито, меш №18 (США) Натрійкарбоксиметиловий рують винахід, не обмежуючи його Термін "активкрохмаль, стеарат магнію і тальк просіюють через ний інгредієнт" відповідає сполуці формули (9) або сито, меш №60 (США) і додають до гранул, з яких и фармацевтично прийнятній солі після перемішування пресуванням на таблетковій машині виготовляють таблетки масою 150мг Композиція 1 Тверді желатинові капсули з вмістом Активний інгредієнт Крохмаль, сухий Стеарат магнію Усього 250мг на капсулу 200мг на капсулу Юмг на капсулу 460мг Композиція 2 Таблетка, яка містить Активний інгредієнт Целюлоза мікрокристалічна Дюксид кремнію фумігований Стеаринова кислота Усього 250мг на таблетку 400мг на таблетку Юмг на таблетку 5мг на таблетку 665мг Композиція З Аерозольний розчин з вмістом Активний інгредієнт Метанол Пропелант 22 (хлордифторметан) Усього 0,25 25,75 74 100 Активну сполуку змішують з етанолом і до суміші додають частину пропеланта 22, охолоджують до -30°С і переносять до заповнювального пристроя Бажану КІЛЬКІСТЬ ВНОСЯТЬ у резервуар з нержавіючої сталі і додають залишок пропеланта, після чого у резервуарі встановлюють клапан Композиція 5 Капсули з вмістом Активний інгредієнт Крохмаль Мікрокристалічна целюлоза Стеарат магнію Усього 80мг на капсулу 59мг на капсулу 59мг на капсулу 2 на капсулу 200мг Активний інгредієнт, крохмаль, целюлозу і стеарат магнію змішують, просіюють через сито, меш №45 (США) і заповнюють тверді желатинові капсули Композиція 6 Супозиторії, які містять Активний інгредієнт Глицериди насичених жирних кислот Усього 225мг 2000мг 2225мг Активний інгредієнт просіюють через сито, меш No 60 (США) і суспендують у глицеридах насичених жирних кислот, розплавлених при найменшому нагріванні" Суміш розливають у двограмові супозиторійні форми і охолоджують Композиція 7 Суспензія, яка містить Активний інгредієнт Натрійкарбоксиметилова целюлоза Сироп Розчин бензойної кислоти Смакові добавки Забарвлював Очищена вода 50мг 50мг 1,25мл 0,10мл за потребою за потребою до 5мл 33 57772 Аісгивний інгредієнт просіюють через сито, меш №45 (США) і змішують з натрійкарбоксиметиловою целюлозою і сиропом, одержуючи однорідну пасту 3 перемішуванням додають розчин бензойної кислоти, смакові добавки і забарвлювач 34 Такий розчин призначається для внутрішньовенного уведення з швидкістю 1 мл/хвил Композиція 9 Таблетка, яка містить розводені належною КІЛЬКІСТЮ ВОДИ, ПІСЛЯ ЧОГО додають воду до бажаного об'єму Активний інгредієнт Силікат кальцію Поперечношитий повідон Стеарат магнію Усього Композиція 8 Композиція ДЛЯ внутрішньовенного уведення, яка містить Активний інгредієнт Ізотонічний сольовий розчин Комп'ютерна верстка О Воробей 292мг на таблетку 146мг на таблетку 146мг на таблетку 5мг на таблетку 589мг ЮОмг ЮООмл Підписано до друку 05 08 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна