Штам дріжджів phaffia rhodozyma ibm y-5021 – продуцент каротиноїдів

Штам дріжджів Phaffia rhodozyma IMB Y-5021, продуцент каротиноїдів, який синтезує 800-1000 мкг каротиноїдів/г сухої маси клітин. (19) (21) u200507454 (22) 26.07.2005 (24) 15.05.2006 (46) 15.05.2006, Бюл. № 5, 2006 р. (72) Влізло Василь Васильович, Колісник Ганна Василівна, Шах Євген Степанович, Шах Андрій Євгенович, Каплінський Василь Васильович, Ка 3 14147 4 лення. протягом 4-х діб і відбирали мутанти-надсинтетики Клітини штаму асимілюють сахарозу, мальтокаротиноїдів за інтенсивністю забарвлення колозу, рафінозу, проте не використовують лактозу і ній. Одержаний таким способом штам P. гліцерол. При культивуванні в середовищі вищеrhodozyma ІMB Y-5021 синтезує і нагромаджує в вказаного складу, температурі 20°С і аерації 0,6л клітинах 800-1000 мкг/г сухої маси каротиноїдів. повітря\л середовища на ферментері АНКУМ - 2М Штам дріжджів P. rhodozyma ІMB Y-5021 спостерігається дві фази росту: 1 - дихальнопройшов лабораторне випробовування. При лабоферментативна, під час якої утворюється етанол і раторній перевірці одержаного штаму визначали друга дихальна фаза росту, коли використовуєтьпоказники біомаси в порівнянні до вихідного штаму ся етанол, утворений у першій фазі росту. Біомаса і кормових дріжджів. клітин на четверту добу вирощування досягає 4г/л. Приклад: Дріжджі вирощували в середовищі Каротиноїди синтезуються протягом усього періотакого складу (г/л): КН2РO4 - 1; MgSO4 x 7Н2O - 0,2; ду культивування, однак найбільша їх кількість (NHO2SO4 - 2; СаСl2 х 2Н2O - 0,1; сахароза - 15; синтезується в стаціонарній фазі, коли ріст біомапивне сусло - 20; дріжджовий екстракт - 2; біотин – си припиняється. 2 х 10-6 при температурі 20°С і аерації 0,6л повітЯк джерело азоту клітини використовують суря\л середовища на ферментері АНКУМ - 2М прольфат амонію, диамоній-фосфат, сечовину але не тягом 4-х діб при температурі 20° С. Каротиноїди в нітрат калію і етиламін. екстрактах клітин визначали колориметричним Відношення до кисню. Штам P. rhodozyma IMB методом. Порівняння складу якості біомаси кормоY-5021 відноситься до факультативних аеробів. вих дріжджів і дріжджів P. rhodozyma вихідного і Штам росте при температурі 18-26° С, оптиселекціонованого штамів приведено в таблиці 1. мум температури 20° С, оптимум рН становить 4,0-6,0. Таблиця 1 Штам зберігається на агаризованому суслоагарі в холодильнику. Клонується 2 рази на рік і Порівняльна характеристика біомаси кормових і відсівається 3-4 клони на 7-10 день вирощування, каротинсинтезуючих дріжджів Phaffia rhodozyma використовуючи маркерну ознаку штаму. вихідного і селекціонованого штамів Крім відомої функції як попередників вітаміну А, каротиноїди регулюють ріст і морфогенез у тваДріжджі рин, проявляють стимулюючий вплив на імунну P. P. систему, володіють антимутагенними і антиканцеПоказники Кормо- rhodozyma rhodozyma рогенними властивостями, зменшують алергію, ві NRRL1MB Yпосилюють процеси детоксикації. Каротиноїди є 10921 5021 важливим компонентом неферментативної систеСирий проте44,2 26,9±0,15 24,6±0,05 ми антиоксидантного захисту в організмі тварин. їн, % Особливої уваги заслуговує роль каротиноїдів у Сирий жир, % 3,3 16,95±0,05 17,9±0,20 процесах відтворення, зокрема їх вплив на функСира клітко3,4 3,3 3,3 ціонування яєчників та продукцію прогестерону і вина, % лютеотропного гормону. Тіамін, мг/кг 18,0 20,0 20,0 Біомаса заявленого штаму дріжджів P. Рибофлавін, 36,0 48,6 60,0 rhodozyma ІMB Y-5021 може бути використана як мг/кг кормова добавка для тварин, що збагачує корми Каротиноїди, білком, такими незамінними амінокислотами як сліди 230,5 840,0 мг/кг лізин, аргінін, лейцин, ізолейцин, а також ненасиКоефіцієнт ченими жирними кислотами. перетравності, 90,8 89,7 90,6 Таким чином, селекціонований штам P. % rhodozyma ІMB Y-5021, клітини, якого містять виКальцій,% 1,20 1,25 1,28 сокий вміст каротиноїдів можна використовувати Фосфор,% 0,36 0,36 0,37 при промисловому виробництві дріжджів з метою Натрій,% 0,25 0,24 0,25 створення кормових препаратів каротиноїдів. Лізин,% 2,85 4,48±0,04 5,41±0,04* Штам дріжджів P. rhodozyma 1MB Y-5021 був Гістидин,% 0,75 2,54±0,08 3,02±0,09* одержаний з дикого штаму NRRL-10921, який синтезує 180-300 мкг\г сухої маси каротиноїдів, шляАргінін,% 2,04 3,75±0,08 4,99±0,06* хом ступінчастого мутагенезу з наступним відбоТреонін,% 2,06 2,44±0,06 2,87±0,06 ром продуктивніших клонів. Валін,% 2,30 2,75±0,05 3,13±0,05 Мутагенез проводили опроміненням лампою Метіонін,% 0,42 0,08±0,01 0,11±0,07 БУФ-15 протягом 10 хвилин на відстані 1м. Після Ізолейцин 2,07 1,75±0,07 2,09±0,07* опромінення вихідного штаму клітини висівали на Лейцин,% 2,82 4,32±0,08 5,09±0,09* чашки Петрі з агаризованим середовищем і кульТирозин,% 1,30 1,82±0,08 1,99±0,09 тивували протягом 4-х діб при температурі 23° С. Фенілаланін,% 1,70 0,45±0,05 0,51±0,05 Відбирали колонії інтенсивного оранжевого кольоЛінолева кисру і найпродуктивніші клони піддавали наступному 3,44±0,30 7,09±0,44 лота,% мутагенезу шляхом обробки 0,02% розчину нітроЛіноленова зогуанідину протягом 5 хв. Оброблені таким чином 1,31±0,08 1,64±0,06 кислота,% і відмиті від мутагену клітини висівали на чашки Петрі з агаризованим середовищем, культивували 5 14147 6 Як видно із даних таблиці, селекціонований мінних амінокислот як лізин, аргінін, лейцин, ізоштам дріжджів Р. rhodozyma IMB Y-5021 нагромалейцин. джує в клітинах 840мкг/г сухої маси каротиноїдів, Штам дріжджів P. rhodozyma IMB Y-5021 зберіщо в 3,7 рази перевищує вміст цих речовин в клігається в депозитарії Інституту мікробіології та тинах вихідного штаму P. rhodozyma NRRL-10921. вірусології НАН України. Також біомаса селекціонованого штаму дріжджів порівняно з кормовими містить більше таких неза Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601