Спосіб одержання бактеріальної закваски “біфідолакт”

Реферат: Спосіб одержання бактеріальної закваски "Біфідолакт" для кисломолочних продуктів передбачає приготування поживного середовища, приготування інокуляту видів мікрофлори біфідобактерій, термофільних молочнокислих та пропіоновокислих бактерій, накопичення біомаси в поживному середовищі на молочній основі зі стимуляторами росту, відокремлення біомаси від культуральної рідини, змішування з захисним середовищем та сублімаційне сушіння. До складу бактеріальної закваски залучають біфідобактерії Bifidobacterium bifidum ІMB В-7032, Bifidobacterium longum ІMB В-7033, Bifidobacterium adolescentis ІMB B-7035 у співвідношенні 1:1:1, термофільні молочнокислі Streptococcus salivarius ssp. thermophilus ІMB B7179, ВКПМ В-7773, В-7774 у співвідношенні 1:1:1, та пропіоновокислі бактерії Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii 1MB B-7290, зі співвідношенням між видами мікрофлори 5:3:2. Проводять накопичення біомаси - сумісне культивування біфідобактерій та пропіоновокислих бактерій за температури (37±1) °С протягом (7±1) год., після чого вносять термофільні молочнокислі бактерії і культивують ще (7±1) год. UA 107656 U (12) UA 107656 U UA 107656 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до біотехнології і може застосовуватись для одержання бактеріальної закваски та виробництва кисломолочних продуктів. Відомо спосіб приготування бактеріального концентрату "Старт" для виробництва функціональних кисломолочних продуктів [Патент України № 22655А, С12N 1/20, А23С 23/00, 1998]. До складу мікрофлори цього бакконцентрату входить тільки один вид біфідобактерії, а саме Bifidobacterium longutn, який має високу антагоністичну активність до збудників шлунковокишкових захворювань та молочнокислі бактерії виду Streptococcus salivarius ssp. thermophilus. Однак вказаний склад обмежує лікувально-профілактичні властивості бакконцентрату. Найбільш близьким до способу, що заявляється, є спосіб одержання замороженої концентрованої закваски на основі симбіозу пробіотичних бактерій, яка використовується для приготування кисломолочних напоїв та біологічно-активної добавки до їжі [RU № 2372782, МПК А23С 9/12, опубл. 20.11.2009]. Згідно з цим способом у поживне середовище, яке готується на основі освітленої сирної сироватки з додаванням буферних солей, аскорбінової кислоти, 3 пептону, і хлористого кобальту в кількості 0,1-0,2 мг/см , вносять комбіновану закваску з окремо активізованих β-галактозидазою пропіоновокислих та біфідобактерій у співвідношенні 1:1. Накопичення бактеріальної маси проводять за температури (34±1)°С упродовж 19-21 год. Потім бактеріальну масу відокремлюють від культуральної рідини, змішують з захисним середовищем, розливають у флакони і заморожують за мінус (20-30)°С. Спосіб дозволяє 1112 3 одержати закваску, яка містить в 1 г 10 10 КУО/см життєздатних клітин пропіоновокислих та біфідобактерій. Недоліком відомого способу є подовжене культивування упродовж 19-21 год. та малий строк зберігання замороженої закваски. Задачею корисної моделі, що пропонується, є розробка способу одержання бактеріальної закваски, в якому шляхом удосконалення технологічних параметрів, складу мікроорганізмів та співвідношення між ними забезпечується підвищення біологічної активності закваски, завдяки чому кінцевий продукт має високі лікувально-профілактичні властивості, зменшується тривалість його приготування та подовжується термін зберігання. Поставлена задача вирішується тим, що в способі одержання бактеріальної закваски "Біфідолакт", який заявляється, при одержанні бактеріальної закваски передбачається цілеспрямований відбір мікроорганізмів за їх біологічною активністю та пробіотичними властивостями, складання ефективної композиції з числа найбільш активних штамів і збільшення біомаси, оптимізація технологічних параметрів. Спосіб одержання бактеріальної закваски "Біфідолакт" для кисломолочних продуктів, що передбачає приготування поживного середовища, приготування інокуляту видів мікрофлори біфідобактерій, термофільних молочнокислих та пропіоновокислих бактерій, накопичення біомаси в поживному середовищі на молочній основі зі стимуляторами росту, відокремлення біомаси від культуральної рідини, змішування з захисним середовищем та сублімаційне сушіння, у відповідності з технічним рішенням, до складу бактеріальної закваски залучають біфідобактерії Bifidobacterium bifidum ІMB В-7032, Bifidobacterium longum ІMB В-7033, Bifidobacterium adolescentis ІMB B-7035 у співвідношенні 1:1:1, термофільні молочнокислі Streptococcus salivarius ssp. thermophilus ІMB B-7179, ВКПМ В-7773, В-7774 у співвідношенні 1:1:1 та, пропіоновокислі бактерії Рrоріоnibacterium freudenreichii ssp. shermanii ІMB B-7290, зі співвідношенням між видами мікрофлори 5:3:2, проводятьнакопичення біомаси - сумісне культивування біфідобактерій та пропіоновокислих бактерій за температури (37±1)°С протягом (7±1) год., після чого вносять термофільні молочнокислі бактерії і культивують ще (7±1) год. Відмінною ознакою запропонованого способу є використання у заквашувальній композиції трьох різних видів мікроорганізмів, які є складовими нормальної мікрофлори кишечника людини, а саме види мікрофлори: біфідобактерії, термофільні молочнокислі та пропіоновокислі бактерії. Пропонуються три штами виду біфідобактерій: Bifidobacterium bifldum ІMB В-7032, Bifidobacterium longum ІMB В-7033, Bifidobacterium adolescentis ІMB B-7035 (скорочена назва В. bifidum, В. longum, В. adolescentis) у співвідношенні 1:1:1; три штами виду термофільних молочнокислих бактерій Streptococcus salivarius ssp. thermophilus 1MB B-7179, ВКПМ В-7773, В7774 (скорочена назва St. thermophilus) у співвідношенні 1:1:1; один штам виду пропіоновокислих бактерій Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii ІMB B-7290 (скорочена назва P. shermanii), зі співвідношенням між видами мікрофлори 5:3:2, роздільно-сумісне культивування - накопичення біомаси. В способі одержання бактеріальної закваски "Біфідолакт" для виробництва кисломолочних продуктів передбачають такі стадії виробництва: приготування поживного середовища, приготування інокуляту трьох видів мікрофлори, культивування разом біфідо- та пропіоновокислих бактерій, окреме культивування термофільних молочнокислих бактерій, 1 UA 107656 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 змішування їх та сумісне культивування накопичення біомаси, відокремлення біомаси, змішування з захисним середовищем, заморожування та сушіння суспензії біомаси, подрібнення закваски, фасування. Приготування інокуляту трьох штамів біфідобактерій проводять на гідролізатно-молочному середовищі протягом (16±1) годин за температури (37±1)°С в анаеробнихх умовах. Приготування інокуляту трьох штамів термофільних молочнокислих бактерії - в знежиреному молоці за температури (37±1)°С протягом (8±1) годин. Приготування інокуляту штаму пропіоновокислих бактерії в лактатному рідкому середовищі за (30±1)°С протягом (24±1) годин. Сумісне культивування, накопичення мікрофлори біфідобактерій і пропіоновокислих бактерій у поживному середовищі проводять протягом (7±1) годин без перемішування за температури (37±1)°С, після чого вносять термофільні молочнокислі бактерії, стерильні розчини глюкози і аскорбінової кислоти - 1 та 0,05 % відповідно, та культивують, нагромаджують біомасу за температури (37±1)°С ще протягом (7±1) годин при постійному рН 6,5-6,7 і частковою аерацією. Використання спеціально підібраної мікрофлори заквашу вальної композиції бактеріальної закваски - біфідобактерій, термофільних молочнокислих та пропіоновокислих бактерій, забезпечує співвідношення між видами мікрофлори 5:3:2. До складу бактеріальної закваски залучено три штами біфідобактерій, які є домінуючими у кишечному мікробіоценозі, видів В. bifidum 1MB В-7032, В. longum 1MB В-7033, В. adolescentis 1MB В-7035 у співвідношенні 1:1:1; з молочнокислих бактерій залучено три штами St. thermophilus 1MB В-7179, ВКПМ В-7773, В-7774 у співвідношенні 1:1:1, а з пропіоновокислих бактерій - один штам P. shermanii 1MB В-7290. Всі штами є власністю Інституту продовольчих ресурсів НААН та первісно задепоновані у Депозитарії Інституту мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України та БРЦ ВКПМ. Вибір штамів здійснювали на основі вимог, які висуваються до пробіотиків. Особливу увагу приділяли біохімічній і антагоністичній активності штамів, здатності до адгезії, резистентності до продуктів обміну травної системи, а також технологічності. Однією з основних умов, що пред'являються до мікроорганізмів, що входять до складу стартових культур для функціональних продуктів, є їх здатність пригнічувати розвиток небажаної мікрофлори кишечника, що сприяє нормалізації і стабілізації складу мікробіоценозу людини. Антагоністичну активність штамів молочнокислих і біфідобактерії досліджували методом лунок. Тесткультурами були 10 штамів патогенних і умовно-патогенних мікроорганізмів - представників сімейства Enterobacteriaceae, Pseudomonaceae, Micrococcaceae. Штами St. thermophilus пригнічують розвиток таких патогенів як Y. enterocolitica, P. vulgaris, S. aureus, патогенний бровар Ε. coli, Ε. cloaceae. Біфідобактерії пригнічують патогенний бровар Е. coli, E. cloaceae та S. aureus. Пропіоновокислі бактерії активні відносно стафілококів та шигел - зона затримки росту (12-18) мм. Всі досліджені штами не пригнічують розвиток штаму Е. coli M117 представника нормальної мікрофлори кишечника людини. Успішне функціонування мікроорганізмів бактеріальної закваски у травному тракті значною мірою визначається їх адгезивними властивостями. Дослідження адгезії штамів молочнокислих і біфідобактерій проводили в модельних дослідах з використанням ентероцитів людини. Величину спорідненості мікроорганізму до ентероцитів виражали індексом адгезивності (ІА), який виражається числом клітин бактерій, закріплених на основі ентероцитів. Штами пропіоновокислих і біфідобактерій характеризуються досить високими індексами адгезивності (2,7) і (2,9-4,1) відповідно, і дещо вищий цей показник у штамів термофільних молочнокислих бактерій та коливається в межах (3,2-6,2). Відібрані штами біфідобактерій і термофільних молочнокислих бактерій відрізняються високою стійкістю до агресивних компонентів травної системи. Вони розвиваються в молоці, що містить 40 % жовчі, 6,6 % хлориду натрію і 0,6 % фенолу. Молокозсідальна активність штамів термофільних молочнокислих бактерій за оптимальних умов при внесенні 3 % інокуляту досить висока і варіює у межах - від 3,0 до 5,0 год. Штами біфідобактерій сквашують знежирене молоко за температури (42+2)°С і посівної дозі 5 % за (13+1) год., утворюючи однорідний згусток без відділення сироватки, продукт приємного кисломолочного смаку з легким специфічним присмаком оцтової кислоти. Титрована кислотність сквашеного протягом 14 год. молока становить (115±2)°С. Відібрані штами відрізняються один від одного за своїми температурними оптимумами і активністю. Вони стійкі до високих концентрацій жовчі, фенолу і хлориду натрію. Комплекс цих властивостей забезпечує колонізацію кишечника і приживлення в ньому. Крім того, штам P. shermanii має здатність до синтезу вітаміну В12, який є стимулятором росту біфідобактерій. 2 UA 107656 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Завдяки вказаним властивостям залучених штамів бактеріальна закваска і продукт, що виготовляється з її використанням, пригнічує розвиток небажаної мікрофлори та нормалізує мікробний ценоз травної системи людини. Для підвищення ефективності накопичення біфідобактерій застосовується сумісно-роздільні етапи накопичення біомаси бактеріальної закваски: спочатку культивують біфідобактерії разом з пропіоновокислими бактеріями до досягнення максимальної швидкості росту, після чого вносять молочнокислі бактерії. Сумісне культивування, накопичення біомаси біфідобактерій і пропіоновокислих бактерій у поживному середовищі проводять протягом (7±1) годин без перемішування за температури (37±1)°С, після чого вносять термофільні молочнокислі бактерії, стерильні розчини глюкози і аскорбінової кислоти 1 та 0,05 % відповідно, та культивують, нагромаджують мікрофлору за температури (37±1)°С ще протягом (7±1) годин при постійному рН 6,5-6,7 і частковою аерацією. При складанні рецептури поживного середовища ураховано потреби у поживних речовинах кожної з культур бактеріального препарату. Для приготування поживного середовища відновлене сухе знежирене молоко гідролізують протосубтиліном. Потім додають стимулятори росту. Середовище стерилізують, охолоджують до температури 37 °C і встановлюють рН 6,87,0. Як стимулятор роту термофільних молочнокислих бактерій передбачено збагачення поживного середовища нативним казеїном. З цією метою в готове поживне середовище вносять 1 % стерильного знежиреного молока. Це забезпечує збільшення кількості біомаси і чисельності мікроорганізмів в сухій бактеріальній заквасці. Зменшення частки біфідобактерій знижує біологічну активність кінцевого продукту, а збільшення призводить до тривалого сквашування молока та погіршення органолептичних показників. Для підвищення ефективності накопичення числа біфідобактерій, їх культивують разом з пропіоновокислими бактеріями без перемішування за температури (37±1)°С протягом (7±1) годин, після чого вносять термофільні молочнокислі бактерії, стерильні розчини глюкози і аскорбінової кислоти - 1 та 0,05 % відповідно, та культивують, нагромаджують мікрофлору за температури (37±1)°С ще протягом (7±1) годин при постійному рН 6,5-6,7 і частковою аерацією. При цьому накопичення біомаси проводять з періодичною або безперервною нейтралізацією культуральної рідини. У період активного росту культур на 8-9 годину передбачено додаткове збагачення поживного середовища розчином 5 г глюкози. Такий спосіб накопичення біомаси забезпечує співвідношення між видами мікрофлори: біфідобактерії, термофільні молочнокислі та пропіоновокислі - 5:3:2. В результаті отримують бактеріальну 10 10 закваску, яка містить в 1 г не менше 110 життєздатних клітин біфідобактерій, 110 9 молочнокислих і 110 пропіоновокислих бактерій. Спосіб здійснюють таким чином. Готують поживне середовище. Рецептура поживного середовища: У 1 дм водопровідної води розчиняють 30,0 г сухого знежиреного молока, встановлюють рН 6,8, суміш нагрівають до 55 °C, вносять 0,3 г протосубтиліну активністю 70 од. і витримують за цих умов 2,5 години. Після гідролізу в середовище вносять 5 г лактози, 5 г тризаміщеного лимоннокислого натрію, 5 г оцтовокислого натрію, 2 г дріжджового екстракту, 0,5 г сірчанокислого 7-водного магнію, 0,05 г 3 сірчанокислого 4-водного марганцю 0,1 г сірчанокислого 7-водного заліза (III) 0,02 дм кукурудзяного екстракту. В середовищі, шляхом додавання 40 % розчину гідрооксиду натрію встановлюють рН 7,8 і стерилізують за температури 121 °C протягом 30 хв., активна кислотність середовища після стерилізації - 6,8 од. рН і охолоджують до температури 55 °C; окремо готують розчини: глюкози - 20 г розчиняють в 100 см дистильованої води, аскорбінової кислоти - 0,5 г 3 розчиняють в 50 см дистильованої води, та стерилізують за (112±1)°С упродовж 15 хв. В готове середовище вносять 1 % стерильного знежиреного молока. Приготування інокуляту трьох штамів В. bifldum, В. longum, В. adolescentis у співвідношенні 1:1:1 проводять в гідролізатно-молочному середовищі протягом (16±1) годин за температури (37±1)°С в анаеробних умовах. Приготування інокуляту трьох штамів St. thermophilus у співвідношенні 1:1:1- в знежиреному молоці за температури (37±1)°С протягом (8±1) годин. Приготування інокуляту штаму P. shermanii в лактатному рідкому середовищі за (30±1)°С протягом (24±1) годин. В поживне середовище вносять 5 % біфідобактерій та 2 % пропіоновокислих бактерій. Витримують, не перемішуючи, за температури (37±1)°С протягом (7±1) годин, після чого вносять 3 % термофільних молочнокислих бактерій та проводять спільне культивування за температури (37±1)°С ще протягом (7±1) годин. На 8-9 годину проводять додаткове збагачення поживного середовища розчином 5 г глюкози. 3 UA 107656 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Після закінчення накопичення біомасу відокремлюють від культуральної рідини і змішують з захисним середовищем, у співвідношенні 1:2 або 1:3, утворюється суспензія. Стерильне захисне середовище містить 15 % сахарози 3-4 % желатину та 10 % сухого знежиреного молока. Суспензію заморожують і висушують у сублімаційній сушарці за температури від (-40)°С до (+30)°С. Масова частка вологи в одержаній сухій заквасці не більше 5 %. Застосування цих технологічних прийомів дозволяє за (14±1) год. культивування одержати з 3 1 дм культуральної рідини 15,8 г сухого препарату - бактеріальної закваски "Біфідолакт". Суху біомасу подрібнюють, розфасовують у стерильну тару і закупорюють. Визначено термін зберігання бактеріальної закваски "Біфідолак", який складає 6 місяців за температури (4±2)°С, та 12 місяців за - мінус (18±2)°С. Готовий препарат не потребує активізації. Приклад 1. Одержання бактеріальної закваски "Біфідолакт" 3 Готували поживне середовище у 70 дм водопровідної води розчиняли 2100 г сухого знежиреного молока, встановлювали рН 6,8, суміш нагрівали до 55 °C, вносили 12 г протосубтіліну активністю 70 од. і витримували за цих умов 2,5 год. Після гідролізу в середовище вносили 350 г лактози, 350 г тризаміщеного лимоннокислого натрію, 140 г дріжджового екстракту, 1,4 л кукурудзяного екстракту, 35 г сірчанокислого 7-водного магнію, 3,5 г сірчанокислого 4-водного марганцю. 7 г сірчанокислого 7-водного заліза (III) В середовищі, шляхом додавання 40 % розчину гідрооксиду натрію, встановлювали рН 7,8 і стерилізували за температури 121 °C протягом 30 хв., активна кислотність середовища після стерилізації - 6,8 од. рН, і охолоджували до температури 55 °C. 3 Окремо готували дві ємності розчину глюкози - 350 г розчиняли в 2000 см дистильованої 3 води та розчин аскорбінової кислоти - 35 г розчиняли в 700 см дистильованої води, та стерилізували за (112±1)°С упродовж 15 хв. 3 Готували розчин знежиреного молока - 100 г молока розчиненого в 900 см води та стерилізували за (121±1)°С упродовж 15 хв. У підготовлене поживне середовище додавали одну ємність розчину глюкози та розчин аскорбінової кислоти. Активна кислотність середовища 6,5 од. рН. Середовище охолоджували до (37±2)°С. Інокулят біфідобактерій готували в гідролізатно-молочному середовищі шляхом культивування за (37±1)°С трьох видів біфідобактерій В. bifidum 1MB Н-7032, В. longum 1MB В7033, В. adolescentis ІMB В-7035 у співвідношенні 1:1:1 протягом 16 годин. Інокулят пропіоновокислих бактерій P. freudenreichii ssp. shermanii ІMB В-7290 готували шляхом культивування цих бактерій в лактатному рідкому середовищі за (30±1)°С протягом 24 годин. Інокулят термофільних молочнокислих бактерій готували шляхом культивування 3 штамів S. salivarius ssp. thermophilus ІMB В-7179, ВКПМ В-7773, В-7774 у співвідношенні 1:1:1 в знежиреному молоці за температури (37±1)°С протягом 8 годин. 3 У поживне середовище вносили 1 дм розчину знежиреного молока, інокуляти біфідобактерій 3,5 л та 1,4 л пропіоновокислих бактерій Нагромадження бактеріальної мікрофлори вели за (37±1)°С протягом 7 годин. Після чого вносили 2,1 л інокуляту термофільних молочнокислих бактерій, ще додавали 3 другу ємність з розчином глюкози 350 г в 2000 см дистильованої води. Потім при сумісному культивуванні продовжували накопичення біомаси бактеріальної мікрофлори за (37±1)°С протягом 7 годин. За накопичення біомаси бактеріальної мікрофлори проводили розкислення культуральної рідини 25 %-им водним розчином аміаку до рН 6,8. В кінці росту культуральну рідину охолоджували до 12 °C, нейтралізували до рН 6,6 і центрифугували. Одержану біомасу змішували у співвідношенні 1:2 або 1:3 з захисним середовищем. Утворювалася суспензія біомаси. 3 Готували 2 дм захисного середовища з окремих стерильних розчинів із розрахунку: 200-300 3 г цукрози та 60-80 г желатину, розчинені в 1,0 дм дистильованої води і стерилізовані за 3 (115±1)°С упродовж 15 хв.; 100 г сухого знежиреного молока у 1,0 дм водопровідної води, стерилізували за (121±1)°С упродовж 15 хв. Суспензію біомаси розливали у кювети з висотою шару 6 мм, заморожували і висушували у 10 10 сублімаційній сушарці. В 1 г сухої закваски міститься 1•10 КУО біфідобактерій, 1 • 10 КУО 9 молочнокислих бактерій та 1,5 •10 КУО - пропіоновокислих бактерій. Закваска має високу активність, 1 г закваски сквашує 1 літр молоко за (7±1) годин. Кінцевий продукт має приємний смак і зберігається протягом 7 діб без суттєвих змін за температури (3±1)°С. Приклад 2. Приготування молочнокислого продукту з використанням бактеріальної закваски "Біфідолакт" 4 UA 107656 U 5 10 15 Молоко із вмістом жиру 2,5 %, пастеризували за температури 86 °C із витримкою 20 хв, охолоджували до температури заквашування 37 °C та вносили бактеріальну закваску в кількості 10 г/т. Сквашували протягом 7-8 годин. Титрована кислотність готового продукту - 70°Т, активна - 4,6 од. рН. Готовий продукт характеризується однорідною, в міру в'язкою консистенцією, без 3 відділення сироватки. Колір білий, з кремовим відтінком. В 1 см продукту загальна кількість 7 8 біфідобактерій -3,4•10 КУО, термофільних молочнокислих бактерій - 9,8-10 КУО, 6 пропіоновокислих бактерій 1,5•10 КУО. Термін зберігання продукту - 7 діб за температури (3±1)°С. Таким чином, пропонується корисна модель: спосіб одержання бактеріальної закваски "Біфідолакт" з підвищеною біологічною активністю для прямого внесення, в якій бактеріальна 10 10 закваска "Біфідолак" в 1 г містить 1•10 КУО біфідобактерій, 1• КУО молочнокислих бактерій 9 та 1•10 КУО пропіоновокислих бактерій. Термін зберігання закваски "Біфідолак" становить 6 місяців за температури (4±2)°С, та 12 місяців за - мінус (18±2)°С. Кінцевий кисломолочний продукт гарантованої високої якості, пригнічує розвиток небажаної мікрофлори та нормалізує мікробний ценоз травної системи людини, має приємний смак і зберігається протягом 7 діб без суттєвих змін за температури (3±1)°С. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 20 25 30 Спосіб одержання бактеріальної закваски для кисломолочних продуктів, що передбачає приготування поживного середовища, приготування інокуляту видів мікрофлори біфідобактерій, термофільних молочнокислих та пропіоновокислих бактерій, накопичення біомаси в поживному середовищі на молочній основі зі стимуляторами росту, відокремлення біомаси від культуральної рідини, змішування з захисним середовищем та сублімаційне сушіння, який відрізняється тим, що до складу бактеріальної закваски залучають біфідобактерії Bifidobacterium bifidum ІMB В-7032, Bifidobacterium longum ІMB В-7033, Bifidobacterium adolescentis ІMB B-7035 у співвідношенні 1:1:1, термофільні молочнокислі Streptococcus salivarius ssp. thermophilus ІMB B-7179, ВКПМ В-7773, В-7774 у співвідношенні 1:1:1, та пропіоновокислі бактерії Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii 1MB B-7290, зі співвідношенням між видами мікрофлори 5:3:2, проводять накопичення біомаси - сумісне культивування біфідобактерій та пропіоновокислих бактерій за температури (37±1) °С протягом (7±1) год., після чого вносять термофільні молочнокислі бактерії і культивують ще (7±1) год. Комп’ютерна верстка О. Рябко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 5