Спосіб кріоконсервування хлібопекарських дріжджів saccharomyces cerevisiae

Корисна модель належить до кріобіології і може бути використана в біотехнології при виготовленні промислових заквасок для хлібопекарської та пивоварної промисловостей. Найбільш близьким до заявленого за своєю суттю є спосіб кріоконсервування хлібопекарських дріжджів Saccharomyces cerevisiae, відповідно до якого культури різних рас дріжджів попередньо вирощують на скошеному сусло-агарі 48 годин при 30°С, змивають з поверхні косяка 8%-ним розчином сусла та отримані суспензії переносять на рідке повноцінне середовище UERD. Культивування здійснюють 24 години при 30°С з аеруванням. Суспензії клітин, які знаходяться в стаціонарній фазі росту, розливають у металеві контейнери та заморожують зі швидкістю 0,4°С/хв. від кімнатної температури до - 196°С. Відігрів біологічного матеріалу здійснюють при температурі 30°С. Життєздатність різних рас хлібопекарських дріжджів S. cerevisiae визначають по кількості колонієутворюючих одиниць (КУО) [1]. Однак даний спосіб не забезпечує високої життєздатності клітин після кріоконсервування. Вона складає 64,47-67,69% у залежності від раси хлібопекарських дріжджів S. cerevisiae (Табл.). В основу корисної моделі поставлена задача створити такий спосіб кріоконсервування хлібопекарських дріжджів S. cerevisiae, в якому, за рахунок зміни умов відігріву, забезпечувалась би можливість збільшити життєздатність клітин. Ця задача вирішується тим, що в способі кріоконсервування хлібопекарських дріжджів S. cerevisiae, який включає дводобове культивування на скошеному сусло-агарі при 30°С, змивання клітин з поверхні косяка 8%-ним розчином сусла, перенесення отриманої суспензії на рідке повноцінне середовище UERD, культивування протягом 24 годин при 30°С з аеруванням, розлив суспензії клітин в кріопробірки, заморожування зі швидкістю 1±0,1°С/хв. від кімнатної температури до - 196°С і відігрів при температурі 37°С, згідно з корисною моделлю, в процесі відігріву до суспензії клітин додають спиртовий розчин апіекстракту до кінцевої концентрації 0,050,5мг/мл. Для одержання апіекстракту використовуються бджоли, які загинули природною смертю. Апіекстракт містить високі концентрації флавоноїдів і каротиноїдів та має антиоксидантну і біологічну активності [2]. Спосіб, що заявляється, дає можливість підвищити життєздатність клітин у суспензіях хлібопекарських дріжджів S. cerevisiae після кріоконсервування на 20-33% (Табл.). Крім того, він дозволяє значно зменшити ризик контамінаціі заквасок хлібопекарських дріжджів S. cerevisiae у промислових умовах за рахунок присутності спирту в складі апіекстракту. Приклад здійснення способу. Культури промислових хлібопекарських дріжджів S. cerevisiae раси 1 і 2 попередньо культивували на скошеному сусло-агарі протягом 48 часов при 30°С, змивали з поверхні косяка 8%-ним розчином сусла та отриману суспензію дріжджів переносили на жидке повноцінне середовище UERD. Для отримання культури в стаціонарній стадії розвитку здійснювали накопичення біомаси на середовище UERD протягом 24 годин при 30°С за умов безупинного аерування. Заморожування клітинних суспензій (Імл) здійснювали в кріопробірках "Nunk" об'ємом 1,8мл на програмному заморожувачі біооб'єктів зі швидкістю 1±0,1°С/хв. від кімнатної температури до 40°С, з подальшою стабілізацією протягом 3 хв. і зануренням їх у рідкий азот (-196°С). Відігрівали кріопробірки з клітинними суспензіями дріжджів у водяній бані при 37°С до зникнення твердої фази. Потім у кожну пробу вносили апіекстракт до кінцевих концентрацій 0,05; 0,25; 0,5; 1мг/мл і еквілібрували протягом 20хв при температурі 30°С. Життєздатність різних рас дріжджів S. cerevisiae визначали підрахунком макроколоній (КУО), які виросли на агаризованому живильному середовищі [3]. Результати, наведені в таблиці, свідчать, що застосування апіекстракту на етапі відігріву забезпечує високу життєздатність клітин після кріоконсервування - 84-97%. Це свідчить про стимуляцію репараційних процесів, що відбуваються в кріоконсервованих клітинах дріжджів в присутності апіекстракту. Таблиця Життєздатність різних рас дріжджів S. cerevisiae після кріоконсервування Відігрів без апіекстракту 1мг/мл апіекстракту (20% спирту) 0,5мг/мл апіекстракту (10% спирту) 0,25мг/мл апіекстракту (5% спирту) 0,05мг/мл апіекстракту (1% спирту) за прототипом Кількість КУО (% від контрольних значень) Промислова Промислова раса S. раса S. cerevisiae 1 cerevisiae 2 51,64±6,38 69,12±5,83 Джерела інформації: 50,38±8,76 74,57±9,30 93,63±3,69 97,44±6,52 88,36±7,37 90,22±5,69 90,20±4,33 84,31±5,26 64,47 67,69 1. Методические рекомендации по технологическому процессу криоконсервирования хлебопекарных дрожжей/Сост. Цуцаева А.А и др.- Харьков-1987. -С.8-11. 2. Krzyminsky К., Kadnikova N., Roshal A., Tynynyka L., Synchykova О., Sandomirsky В. Biological activity of hydrophilic bee extract// The FEBS Journal.- 2006.-V.273, suppl.l. -Abstracts. - P.299. 3. Луста К.А., Фихте Б.А. Методы определения жизнеспособности микроорганизмов. -Пущино, 1990. -С.17.