Спосіб одержання бактеріального концентрату бтп-ф для виробництва кисломолочних продуктів

1 Спосіб одержання бактеріального концентрату для кисломолочних продуктів, що передбачає приготування шокуляту біфідобактерій, молочнокислих та пропюновокислих бактерій, накопичення біомаси в живильному середовищі на молочній основі зі стимуляторами росту, відокремлення біомаси від культуральної рідини, змішування з захисним середовищем та сублімаційне сушіння, який відрізняється тим, що до складу бактеріального концентрату залучають 3 види біфідобактерій Bifidobactenum bifidum 1MB Н-7032, В longum 1MB В-7033, В adolescents 1MB В-7035 у співвідношенні 1 1 1 , з молочнокислих бактерій 3 штами Streptococcus sahvanus ssp thermophilus ВКПМ В4464, В-7773, В-7774 у співвідношенні 1 1 1 та 1 штам пропюновокислих бактерій Propionibactenum freudenreichu ssp schermanii ВКПМ В-7530, а співвідношення між компонентами мікрофлори становить 5 3 2 2 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що спочатку проводять сумісне культивування біфідобактерій і пропюновокислих бактерій протягом 6-7 годин, після чого вносять молочнокислі бактерії і продовжують накопичення біомаси протягом 6-7 годин 3 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що в живильне середовище після 6-7 годин культивування в ньому біфідобактерій і пропюновокислих бактерій додатково вносять 1 % стерильного знежиреного молока та стерильні розчини глюкози і аскорбінової кислоти 1 % та 0,05 % ВІДПОВІДНО (О Винахід відноситься до біотехнологм і може застосовуватись для одержання бактеріального концентрату та виробництва кисломолочних продуктів спеціального призначення Відомо спосіб приготування бактеріального концентрату для виробництва ряжанки, який передбачає культивування молочнокислих термофільних бактерій в живильному середовищі [Концентрат бактеріальний для ряжанки ТУ У 46 39 ГО 277-99] Однак до складу мікрофлори цього бактеріального концентрату входить тільки один вид мікроорганізмів Streptococcus sahvanus ssp thermophilus, що обмежує лікувальнопрофілактичні властивості концентрату і кінцевого продукту Відомо також спосіб приготування бактеріального концентрату "Старт" для виробництва функціональних кисломолочних продуктів [Патент України № 22655А, С12 N 1/20, А23 С 23/00, 1998] До складу мікрофлори цього бакконцентрату входять як молочнокислі бактерії виду Streptococcus sahvanus ssp thermophilus, так і біфідобактерІІ, які мають високу антагоністичну активність до збудників шлунково-кишкових захворювань Однак до складу цього бакконцентрату залучено тільки один вид біфідобактерій, а саме Bifidobactenum longwn, що також обмежує лікувально-профілактичні властивості бакконцентрату Найбільш близьким до способу, що заявляється, є спосіб одержання сухого бактеріального препарату "Симбілакт-М", що використовується для виробництва кисломолочного продукту "Біфівіт" [Концентрат бактериальный сухой "Симбилакт-М" ТУ У 46 39 ГО 074-96-прототип] Згідно з цим способом в поживне середовище на молочній основі зі стимуляторами росту, вносять інокулят молочнокислих, пропюновокислих, оцтовокислих та біфідобактерій Накопичення біомаси о о ю 51006 здійснюють при температурі (35±2)°С протягом 14Найбільш активно сквашують молоко 16 годин Потім біомасу відокремлюють від термофільні молочнокислі стрептококи при культуральної рідини, змішують з захисним внесенні 3-5% культури тривалість сквашування середовищем, заморожують і висушують Спосіб молока дорівнює 3,5-4,0 години Вони утворюють в дозволяє одержати бакконцентрат, який містить в молоці щільний, в'язкий згусток приємного 10 1г не менше 1 10 життєздатних клітин кисломолочного смаку Біфідобактерм та пропюновокислі бактерії сквашують молоко дуже біфідобактерій, 5 10 молочнокислих бактерій 9 повільно від 12 до 48 годин і утворюють 3 10 пропюновокислих бактерій та 1 10 неоднорідні згустки Біфідобактерм в порівнянні з оцтовокислих бактерій молочнокислими та пропюновокислими Недоліком відомого способу є швидке бактеріями більш СТІЙКІ ДО ВИСОКИХ концентрацій наростання кислотності та погіршення жовчі, хлориду натрію та фенолу Вони можуть органолептики кінцевого продукту при зберіганні в розвиватися в присутності 40% жовчі, 6% NaCI та зв'язку з залученням до складу концентрату 0,6% фенолу і характеризуються досить високими оцтовокислих бактерій, тривале сквашування та індексами адгезивності 2,7-2,9 Комплекс цих малий термін зберігання кінцевого продукту До властивостей забезпечує їхню високу складу концентрату залучено також один вид колонізаційну резистентність Штам біфідобактерій В longum, що обмежує лікувальнопрофілактичні властивості бакконцентрату та пропюновокислих бактерій Р schermami H-110 має кінцевого продукту здатність до синтезу вітаміну Ві2, котрий стимулює розвиток біфідобактерій та підвищує біологічну Завданням винаходу, що пропонується, є активність продукту розробка способу одержання бактеріального концентрату, в якому шляхом зміни технологічних Відібрані штами також характеризуються параметрів, складу мікроорганізмів та високою антагоністичною активністю по співвідношення між ними забезпечується відношенню до широкого кола патогенних підвищення біологічної активності концентрату, мікроорганізмів завдяки чому кінцевий продукт має високі Біфідобактерм пригнічували розвиток лікувально-профілактичні властивості, патогенних кишкових паличок, цитробактера, протею, псевдомонад, сальмонел, шигел та зменшується тривалість його приготування та стафілококів Зони затримки росту коливались від збільшується термін зберігання 10 до 18мм Поставлене завдання вирішується тим, що в способі, який заявляється, при одержанні Пропюновокислі бактерії активні по бактеріального концентрату передбачається відношенню до стафілококів та шигел (зона цілеспрямований відбір мікроорганізмів за їх затримки росту-12-18мм) Менш чутливі до штамів біологічною активністю та пробютичними пропюновокислих бактерій кишкові палички і властивостями, складання ефективної композиції з протей, про що свідчить дещо менший розмір зони числа найбільш активних штамів і збільшення затримки росту тест-культур - 10-12мм біомаси Всі досліджені штами не пригнічують розвиток штаму Е coli M-117-представника нормальної ВІДМІННОЮ рисою запропонованого способу є мікрофлори кишечника людини використання 3 різних видів мікроорганізмів, які є складовими нормальної мікрофлори кишечника ВІДМІННОЮ особливістю способу, що людини, а саме молочнокислих, пропюновокислих пропонується, є те, що для підвищення та біфідобактерій у співвідношенні 3 2 5 Саме це ефективності накопичення біфідобактерій співвідношення між компонентами мікрофлори застосовується ступінчатий спосіб накопичення забезпечує необхідні для лікувальнобіомаси композиції спочатку біфідобактерм профілактичного продукту властивості та його культивують разом з пропюновокислими технологічні характеристики Зменшення долі бактеріями до досягнення максимальної швидкості біфідобактерій знижує біологічну активність росту, після чого вносять молочнокислі бактерії кінцевого продукту, а збільшення приводить до Крім того підвищенню накопичення біомаси тривалого сквашування молока та погіршення мікроорганізмів сприяє внесення 1% стерильного органолептичних показників знежиреного молока та стерильних розчинів глюкози і аскорбінової кислоти 1% та 0,05% При цьому з біфідобактерій використано З штами домінуючих у кишечному мікробюценозі ВІДПОВІДНО видів Bifidobactenum bifidum MB H-7032, В longum Характеристика відомого і запропонованого 1 MB В-7033, В adolescentis 1 MB В-7035 у бакконцентратів наведена в таблиці співвідношенні 1 1 1 3 молочнокислих бактерій Спосіб здійснюється таким чином використано 3 штами Streptococcus sahvanus ssp Основою поживного середовища є відновлене thermophilus ВКПМ В-4464, В-7773, В-7774 у сухе знежирене молоко, пдролізоване співвідношенні 1 1 1 , а з пропюновокислих протосубтіліном До неї додають буферні солі і бактерій - 1 штам Propiombactenum freudenreichu стимулятори росту Середовище стерилізують, ssp shermami ВКПМ В-7530 Штами підібрані охолоджують до температури 37°С і таким чином, щоб забезпечити стабільність встановлюють рН 6,8-7,0 В готове середовище біологічної активності та органолептичних вносять 5% шокуляту біфідобактерій та 2% показників ферментованого продукту пропюновокислих бактерій Накопичення біомаси здійснюють при температурі 37°С протягом 6-7 Відібрані штами відрізняються один від одного за своїми температурними оптимумами і ГОДИН, ПІСЛЯ ЧОГО ВНОСЯТЬ 3 % МОЛОЧНОКИСЛИХ активністю сквашування молока бактерій, 1 % стерилізованого знежиреного молока 51006 зберігається протягом 7 діб без суттєвих змін Приклад 2 Спосіб здійснюють аналогічно прикладу 1 за винятком того, що термофільні молочнокислі бактерії вносять після 10 годин культивування біфідобактерій та пропюновокислих бактерій Одержаний бактеріальний концентрат 10 9 містить 1 10 біфідобактерій, 1 10 9 пропюновокислих бактерій та 710 молочнокислих бактерій Концентрат малоактивний і сквашує молоко за 12 годин Приклад 3 Спосіб здійснюють аналогічно прикладу 1 за винятком того, що в живильне середовище після 6-7 годин культивування в ньому біфідобактерій і пропюновокислих бактерій вносять інокулят термофільних молочнокислих бактерій без стимуляторів росту (стерилізоване молоко, аскорбінова кислота, глюкоза) Одержаний бактеріальний концентрат містить 2 10 10 біфідобактерій, 1 109 - пропюновокислих бактерій та 510 - молочнокислих бактерій Концентрат малоактивний і сквашує молоко за 12 годин Приклад 4 Застосування бактеріального концентрату для одержання ферментованого молочного продукту Бактеріальний концентрат, одержаний за прикладом 1, вносять в підготовлену до заквашування молочну суміш із розрахунку 5г на 1т Потім молочну суміш із концентратом перемішують та ферментують при 37°С до утворення згустку та наростання кислотності 70°Т Тривалість ферментації складає 9 годин Готовий продукт перемішують і направляють на розлив Продукт має приємний смак і може зберігатися в холодильнику протягом 7 діб без суттєвих змін Приклад 5 Клінічна апробація бактеріального концентрату та кисломолочного продукту, які Інокулят біфідобактерій готують в одержані за прикладами 1,4 пдролізатно-молочному середовищі шляхом культивування при 37°С трьох видів Клінічна апробація бактеріального біфідобактерій у співвідношенні 1 1 1 протягом 16 концентрату та кисломолочного продукту годин проводилася в інституті Екоппєни і токсикології Л І Медведя та медчастини заводу Інокулят пропюновокислих бактерій готують "Київмед препарат" шляхом культивування цих бактерій в лактатному рідкому середовищі при 30°С протягом 24 годин Для проведення КЛІНІЧНИХ досліджень нового виду продукту були відібрані хворі люди з Інокулят термофільних молочнокислих дисбактерюзами 1 та 2 ступеня Кисломолочний бактерій готують шляхом культивування 3 штамів продукт одержували 21 особа, сухий S thermophilus у співвідношенні 111 в бакконцентрат - 10, контрольну групу склали 20 знежиреному молоці при температурі 37°С добровольців Кисломолочний продукт давали протягом 8 годин хворим 2 рази в день по ЮОмл перед обідом і в В процесі накопичення біомаси проводять КІНЦІ робочого дня, сухий концентрат давали по розкислення культуральної рідини 25%-ним 0,25г також 2 рази в день Курс лікування з водним розчином аміаку до рН 6,8 В КІНЦІ росту використанням кисломолочного продукту тривав культуральну рідину охолоджують до 12°С, 21 день, а з сухим концентратом - 10 днів До і нейтралізують до рН 6,6 і центрифугують після курсового прийому кисломолочного продукту Одержану біомасу змішують у співвідношенні 1 1 з і бактеріального концентрату проводились КЛІНІЧНІ, захисним середовищем такого складу (в г/л біохімічні, імунологічні та мікробіологічні сахарози 10, натрію лимоннокислого дослідження тризаміщеного -5, води -до 1л) Суспензію клітин розливають у кювети з висотою шару 6мм, Одержано позитивні результати КЛІНІЧНИХ заморожують і висушують у сублімаційній сушарці досліджень Вже на 15-20 день споживання 1 В 1г сухого бакконцентрату міститься 1 10 кисломолочного продукту загальний стан хворих життєздатних клітин біфідобактерій, 510 1 0 поліпшився, відмічалось зниження холестерину в 9 лактобактерій, 1 10 - пропюновокислих бактерій крові на 37,5мг% та підвищення фосфоліпідів в Концентрат має високу активність, сквашує молоко середньому на 24,8мг% за 8 годин Кінцевий продукт має приємний смак і Встановлено, що регулярне споживання та стерильні розчини глюкози і аскорбінової кислоти - 1% та 0,05% ВІДПОВІДНО та культивують при температурі 37°С ще протягом 6-7 годин Після закінчення процесу накопичення біомасу відокремлюють від культуральної рідини і змішують з захисним середовищем, яке містить 10% сахарози і 5% натрію лимоннокислого Одержану таким чином суспензію заморожують при температурі мінус 35-40°С і висушують у сублімаційній сушарці Суху біомасу подрібнюють, розфасовують у стерильну тару і закупорюють Характеристика бакконцентрату наведена в таблиці Приклад 1 Одержання бактеріального концентрату БТП-Ф У 70л водопровідної води розчиняють 2100г сухого знежиреного молока, встановлюють рН 6,8, суміш нагрівають до 55°С вносять 15г протосубтіліну активністю 70од і витримують 2,5години Після гідролізу в середовище вносять 350г лактози, 350 г тризаміщеного лимоннокислого натрію, 1,4л кукурудзяного екстракту, 3,5г сірчанокислого заліза В середовищі встановлюють рН 7,6 шляхом додавання 30%-ного розчину гідроксиду натрію і стерилізують при температурі 121 °С протягом ЗО хвилин Активна кислотність середовища після стерилізації 7,0 од рН Середовище охолоджують до 37°С і вносять 3,5л завчасно приготовленого шокуляту біфідобактерій та 1,4л пропюновокислих бактерій і культивують при 37°С протягом 6 годин Після ЧОГО вносять 2,1л шокуляту термофільних молочнокислих стрептококів, 1% стерильного знежиреного молока та стерильні розчини глюкози і аскорбінової кислоти 1% і 0,05% ВІДПОВІДНО ПОТІМ продовжують накопичення біомаси ще протягом 6 годин 51006 продукту сприяло нормалізації кишкової мікрофлори Зокрема, на 10-12 добу встановлено зниження КІЛЬКОСТІ патогенних кишкових паличок, патогенних стафілококів, протея у хворих дослідної групи в порівнянні з контрольною, зафіксовано збільшення КІЛЬКОСТІ біфідо- і 8 молочнокислих бактерій В результаті КЛІНІЧНИХ досліджень новий кисломолочний продукт рекомендовано для регулярного вживання при хронічних гастроентероколітах та дисбактерюзах, а також в профілактичних цілях Таблиця Порівняльна характеристика бакконцентратів, які одержано за відомим та заявленим способами Бакконцентрат Показники Біфідобактерм, молочнокислі стрептококи, пропюновокислі та оцтовокислі бактерії заявлений Біфідобактерм, молочнокислі та пропюновокислі бактерії 110 1 0 110 1 1 510м 3 10у 1 10D 510іи 1 10у активізація концентрату 3 години Без активізації 12 годин 8-10 годин 36 годин 7 діб ВІДОМИЙ Видовий склад мікрофлори Число життєздатних клітин в 1г концентрату, КУО - біфідобактерій - молочнокислих бактерій - пропюновокислих бактерій - оцтовокислих бактерій Спосіб одержання кисломолочного продукту з використанням концентрату Тривалість сквашування молока при 37°С Термін зберігання кінцевого продукту ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71