Спосіб виробництва біовіту

Спосіб виробництва бювіту шляхом глибинного культивування продуцента хлортетрацикліну в стерильних умовах, який включає вирощування посівного матеріалу на поживному середовищі, приготування ферментаційного середовища, внесення посівного матеріалу в ферментаційне середовище для вирощування промислової культури, підлужування культуральної рідини, фільтрацію з відокремленням міцеліальної маси і її сушіння, який відрізняється тим, що як продуцент хлортетрацикліну використовують культуру Streptomyces aureofaciens шт 633-ФУ, посівний матеріал вирощують на поживному середовищі такого складу, мас % борошно кукурудзяне або зерно кукурудзи мелене 5,0-6,0 6,0-7,3 екстракт кукурудзяний 5,0-6,0 пропінол 0,02 або жир свинячий 0,2 вода питна 80-90, промислову культуру вирощують у ферментаційному середовищі такого складу, мас % зерно кукурудзи мелене 7,0-8,6 екстракт кукурудзяний 0,5-0,6 амоній хлористий 0,3-0,4 селітра аміачна 0,5-0,6 крейда 0,8-1,0 бензил роданистий 0,0003 кобальт хлористий 0,0002 риб'ячий жир 0,2, причому посівний матеріал і ферментаційне середовище подають у ферментатор з ЛІНІЙ, ЯКІ розташовані нижче його купола, при вирощуванні промислової культури контролюють і підтримують значення рН культуральної рідини, а перед фільтрацією культуральну рідину додатково нагрівають до 60°С, крім того вирощування посівного матеріалу ведуть шляхом розсіву культуральної рідини з ферментатора 00 Винахід відноситься до галузі ветеринарної медицини і може бути використаний при виробництві ветеринарного препарату "Бювіт" Бювіт - це ветеринарний препарат, до складу якого входить антибіотик хлортетрациклін та вітамін В л Препарат застосовується з лікувальною метою при пастерельозі, стерехюзі, сальмонельозі, бронхопневмоніях телят, поросят, пушних звірів, а також при колісентицемм молодняка, птиці Виробництво бювіту складається з таких стадій приготування та вирощування посівного матеріалу, вирощування промислової культури та процес біосинтезу в робочих ферментаторах, відокремлення та сушка міцеліальної маси, стандартизація препарату Для промислових установок на заводах використовують глибинний спосіб вирощування продуцента антибіотика в стерильних умовах За прототип вибраний спосіб виробництва бю віту, описанний в книзі В Б Фремеля "Производство кормового биомицина на спиртовых заводах" М видавництво "Пищевая промышленность", 1966, який включає вирощування посівного матеріалу на поживному середовищі, приготування ферментаційного середовища та вирощування промислової культури, підлужування культуральної рідини, фільтрацію з відокремлення міцеліальної маси і її сушку В описаному способі для вирощування посівного матеріалу використовується поживне середовище - водна суміш крохмалю і кукурудзяного екстракту з додаванням піногасника - кашалотового жиру Промислову культуру вирощують в ферментаторах при непреривному перемішуванні і аерації в ферментаційному середовищі, що містить кукурудзяний екстракт, борошно або картопляний крохмаль, азотнокислий амоній, поварену сіль, крейду, бензил роданістийта кобальт хлористий ю (О ю В результаті отримують кормовий біоміцин, 1кг якого містить 40 - 50г Чистого антибіотика і 1 2 16мг вітамша В-і2 3 Вихід препарату складає не більше 2,5кг з 1м культуральної рідини Причинами такого низького виходу є низька продуктивність штаму, незбалансований склад ферментаційного середовища як по якісному, так і по кількісному складу, втрати хлортетрацикліну при виробництві, нестабільність процесу біосинтезу, низька асептика виробництва В основу винаходу поставлена задача розробки способа виробництва бювіту, в якому за рахунок введення нових операцій і зміни складу поживних середовищ досягається підвищення продуктивності штаму культури, підвищення активності хлортетрацикліну ферментаційного середовища, покращення асептики виробництва, зниження втрат хлортетрацикліну і стабілізація процесу біосинтезу в ферментаторі, що приводить до збільшення виходу (з'єму) препарата з кубічного метра культуральної рідини Поставлена задача вирішується тим, що в способі виробництва бювіту шляхом глибинного культивування продуцента хлортетрацикліна в стерильних умовах, який включає вирощування посівного матеріалу на поживному середовищі, приготування ферментаційного середовища, внесення посівного матеріалу в ферментаційне середовище для вирощування промислової культури, підлужування культуральної рідини, фільтрацію з відокремленням міцеліальної маси і її сушку, згідно винаходу як продуцентхлортетрацикліну використовують культуру Streptomyces aureofaciens шт 633-ФУ, посівний матеріал вирощують на поживному середовищі такого складу, мас % борошно кукурудзяне - 5,0 - 6,0 або зерно кукурудзи мелене - 6,0 - 7,3, екстракт кукурудзяний - 5,0 - 6,0, пропінол - 0,02 або жир свиний - 0,2, вода питна 80 - 90, промислову культуру вирощують в ферментаційному середовищі такого складу, мас % зерно кукурудзи мелене - 7,0 - 8,6, екстрат кукурудзяний -0,5 - 0,6, амоній хлористий - 0,3 - 0,4, селітра аміачна - 0,5 - 0,6, крейда -0,8 -1,0, бензил роданістий - 0,0003, кобальт хлористий - 0,0002, риб'ячий жир - 0,2 Посівний матеріал і ферментаційне середовище подають в ферментатор з ЛІНІЙ, ЯКІ розташовані нижче його куполу, при вирощуванні промислової культури контролюють і підтримують значення рН культуральної рідини, а перед фільтрацією культуральну рідину додатково нагрівають до 60°С, крім того, вирощування посівного матеріалу ведуть шляхом розсіву культуральної рідини з ферментатора Посівний матеріал вирощують шляхом розсіву культуральної рідини з ферментатора Виділені моноізоляти культури перевіряють на продуктивність Продуктивність МОНОІЗОЛЯТІВ досягає 10000 11000мкг/см3, а нароблених з них робочих партій 9500 - 10000мкг/см3 Отримана таким шляхом культура при вирощуванні її в ферментаторі працює набагато продуктивніше і є більш стійкою до несприятливих умов в процесі виробництва Таким чином, культура адаптована до умов 56589 виробництва, проявляє більш продуктивні властивості, ніж та, яка зберігається і розмножується з косяків, як в прототипі Підвищення якості та продуктивності культури досягається за рахунок оптимального складу поживного середовища для посівних апаратів та застосування більш ефективних пшогасників, які беруть в меншій КІЛЬКОСТІ Так, застосування пропшолу або жиру свиного набагато покращує процес піногасіння, що дає змогу ефективно засвоювати культурою кисень повітря Це в свою чергу впливає на якість і швидкість росту культури в посівному апараті Підбір оптимального складу ферментаційного середовища є головним фактором, який забезпечує високий рівень активності культуральної рідини Запропонований склад ферментаційного середовища дозволяє підвищити активність культуральної рідини до 5300 - 5800мкг/см3, що приводить до збільшення з'єму препарату і економи сировини та допоміжних матеріалів Процес синтезу хлортетрацикліну проходить в стерильних умовах Наявність сторонньої мікрофлори негативно впливає на процес біосинтезу, пригнічує ріст культури, знижує нагромадження хлортетрацикліну Покращення асептики виробництва досягається за рахунок того, що посівний матеріал та ферментаційне середовище подають в ферментатор з ЛІНІЙ, які знаходяться нижче купола ферментатора, що дає змогу не інфікувати культуральну рідину в процесі росту промислової культури На кресленні (Фіг) показана схема подачі посівного матеріалу та ферментаційного середовища в ферментатор, де на фігурі зображений ферментатор 1, трубопровід подачі посівного матеріалу 2, трубопровід подачі ферментаційного середовища З, трубопровід подачі повітря 4, паропровід 5, парові вентилі 6, вентилі подачі повітря 7, вентилі подачі ферментаційного середовища 8, вентилі подачі посівного матеріалу 9, трубопровід подачі культуральної рідини на фільтрацію 10 На відміну від прототипу, перед поданням культуральної рідини на фільтрацію її додатково нагрівають до 60°С Це дає змогу скоротити час фільтрації до 4 - 8 годин, а також знизити втрати активності В процесі росту культури в ферментаторі може порушитись масообмін (змінюється густота, недостатньо повітря, розбалансування складу ферментаційного середовища) В результаті може знизитися рН культуральної рідини до значення 5,0 - 5,2 при нормі 5,7 - 6,0 При низькому значенні рН культуральна рідина стає рідкою, припиняється нагромадження антибіотика і її слід передати на фільтрацію Згідно запропонованого способу, рН культуральної рідини контролюють в процесі росту промислової культури і стабілізують значення рН до 5 7 6,0 шляхом внесення в ферментатор необхідної КІЛЬКОСТІ крейди Це дає змогу продовжувати процес біосинтезу до кінця і досягти активності культуральної рідини до 5000мкг/см3 Таким чином, запропонований спосіб дозволяє підвищити з'єм препарату з 1м3 культуральної рідини 56589 Приклад Культуральну рідину з ферментатора розсівають на чашки Петрі з агаризованим середовищем № 1 2 методом розведень Чашки поміщають в термостат і вирощують на протязі 12 - 14 діб при температурі 28°С Відбирають чашки, на поверхні агару яких виросло ЗО - 40 окремих колоній Спори з поверхні кожної колонії переносять в пробірку із скошеним агаризованим середовищем №12 Пробірки поміщають в термостат на 12 - 14 діб і вирощують при температурі 28°С Кожний моноізолят перевіряють на продуктивність шляхом ферментації культури в колбах з ферментаційним середовищем Колби поміщають на качалки з обертами 240 - 260об/хв Ферментацію ведуть на протязі 7 8 діб при температурі 28°С Визначають активність культуральної рідини із колб і відбирають високоактивні моноізоляти Активність МОНОІЗОЛЯТІВ досянає 10000 11000мкг/см Високоактивні моноізоляти використовують для наробки робочих партій, які потім застосовують у виробництві Для вирощування культури в посівних апаратах готують поживне середовище такого складу Зерно кукурудзи мелене 109,5кг Екстрат кукурудзяний 90,0кг Пропінол 0,3кг Вода питна 1300,2л Значення рН до стерилізації 6,8 - 7,2 Середовище стерилізують при температурі 128°С на протязі ЗО хвилин, охолоджують до 28°С і засівають міцеліальною культурою із колб в КІЛЬКОСТІ 1,2л Процес вирощування ведуть при температурі 28°С на протязі 20 - 32 год Після закінчення росту, культуру вносять в ферментаційне середовище, яке приготовлене в ферментаторі об'ємом 63м3 Ферментаційне середовище (V загрузки = 31,5м3), має такий склад Зерно кукурудзи мелене 2299,5кг Екстрат кукурудзяний 157,5кг Амоній хлористий 100,8кг Амоній азотнокислий (селітра) 157,5кг Крейда мелена природна 258,3кг Бензил роданістий 94,5г Кобальт хлористий 63,0г Риб'ячий жир 63,0кг Вода 28463,4л Процес вирощування культури та біосинтез хлортетрацикліну ведуть на протязі 72 годин В процесі росту промислової культури контролюють температуру, значення рН, розвиток культури, стерильність та визначають активність культуральної рідини При порушенні рН культуральної рідини (зниження рН до 5,0 - 5,2), вносять ЗО - 40кг крейди для стабілізації рН до 5,7 - 5,9 Активність культуральної рідини на 72 годину росту становить 5500мкг/см3 Далі культуральну рідину підлужують до рН 8,0 - 8,4, підігрівають до 60°С і фільтрують на рамних фільтр-пресах Фільтрат видаляють, а міцеліальну масу висушують в паровій стрічковій сушарці до вологості 8 -10% Сухий продукт з вмістом хлортетрацикліну 150000мкг/г, розмелюють та стандартизують пшеничним борошном до отримання необхідного вмісту хлортетрацикліну в препараті З'єм препарату при реалізації запропонованого способу досягає 4,8кг/м3 56589 ФІГ. Підписано до друку 05 06 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24