Спосіб побудови калібрувального графіка при визначенні ступеня свіжості яловичини фотометричним методом

Винахід належить до сільського господарства, зокрема, до ветеринарної медицини, і може бути використаний для визначення ступеня свіжості яловичини у виробничих лабораторіях м'ясопереробних підприємств та підприємств по реалізації та зберіганні м'яса, в державних лабораторіях ветеринарної медицини та в лабораторіях ветсанекспертизи на ринку. Аналогом винаходу є метод визначення загального вмісту пігментів в м'ясі [1], в якому для побудови калібрувального графіку використовують готові очищені препарати міоглобіну або свіжі м'язи забійних тварин. Прототипом винаходу є побудова калібрувального графіку при визначенні масової долі білку біуретовим методом [2]. Для побудови графіку готують ряд послідовних розведень стандартного розчину білку, в якості якого використовують кристалічний сиворотковий альбумін. В основу винаходу покладено завдання - розробити спосіб побудови калібрувального графіку для визначення ступеня свіжості яловичини шляхом використання оптичної щільності м'ясо-водної витяжки з реактивом Несслера на КФК-3, що забезпечить достовірність визначення ступеня свіжості яловичини. Завдання вирішується тим, що беруть м'ясо-водну витяжку яловичини у співвідношенні 1:4 розливають по 2см 3 витяжки в 12 центрифужних пробірок і додають в кожну відповідно по зростаючій від 1 краплі до 12 крапель реактиву Несслера. Через 10-15 хвилин центрифугують при 1000об/хв. 5-7хв. і вимірюють інтенсивність забарвлення в кожній пробірці при довжині хвилі 420нм, товщина кювети 1см. Вирішення даного завдання наведено у нижчезазначених прикладах. Приклад 1. Для розробки методу беруть м'ясо-водну витяжку яловичини (1:2), до 1см 3 витяжки в 12 пробірок додають в кожну від 1 до 12 крапель реактива Несслера, настоюють 10-15хв. Центрифугують 5-7хв при 1000об/хв. і в подальшому вимірюють інтенсивність забарвлення на КФК-3 при 440нм, товщина кювета 1см. Приклад 2. Для розробки методу беруть м'ясо-водну витяжку яловичини (1:4), до 1см 3 в 12 пробірок додають в кожну від 1 до 12 крапель реактиву Несслера. Експозиція настоювання 10-15хв. Центрифугують 5-7хв. при 1000об/хв., далі вимірюють інтенсивність забарвлення в кожній пробірці на КФК-3 при довжині хвилі 420нм, товщина кювети 1см. Приклад 3. Для розробки методу беруть м'ясо-водну витяжку (1:4), до 2см 3 в 12 пробірок додають в кожну від 1 до 12 крапель реактиву Несслера, настоюють 10-15хв. Центрифугують 5-7хв. при 1000об/хв., далі вимірюють інтенсивність забарвлення в кожній пробірці на КФК-3 при довжині хвилі 420нм, товщина кювети 1см. Порівняння оцінки результатів випробування вищезазначених способів побудови калібрувального графіку при визначенні свіжості яловичини з реактивом Несслера до прототипу представлені в таблиці 1. Таблиця 1 Порівняння методів визначення свіжості яловичини при побудові калібрувального графіку до прототипу № п/п Показники, що порів нюються Прототип 1 2 3 0,01г крист сивор. альбумін+100см 3 Стандарт. р-н+Н2О 1:10 1 К-ть м'ясної в итяжки для досліду, см 3 2 Співв ідношення у в итяжці м'ясо:дист.вода 3 Реактив , що добав ляється до витяжки 4 5 Кількість розв едень 8 К-ть в итяжки в кожній пробірці,см 3 2 Кількість реактиву, що добав ляється в кожну 15см3 пробірку, в краплях Експозиція пробірок перед 30хв при центрифугув анням 37°С без центриф. 6 7 8 5 Контрольна проба при вимірюв анні 7 8 9 Тов щина кюв ета, см Довжина хв илі, нм Кількість в изначень Стабільність показників оптичної щільності, % 10 Приклади 2 5 3 6 1 1 2 1:2 1:4 1:4 Реактив Несслера 12 2 Реактив Несслера 12 2 Реактив Несслера 12 2 в ід 1 до 12 в ід 1 до 12 в ід 1 до 12 10-15хв. при 20°С 1000об/хв . 5-7хв 10-15хв. при 20°С 1000об/хв . 5-7хв 10-15хв. при 20°С 1000об/хв . 5-7хв дист. в ода дист. в ода дист. в ода дист. в ода 1 550 24 1 440 36 1 420 36 1 420 36 98 92 94 98 Біуретов ий реактив Параметри центрифугування, об/хв ., к-ть хв. 1 4 При побудові калібрувального графіку для свіжої, сумнівної свіжості і несвіжої яловичини оптичні показники в третьому прикладі були самими достовірними. Графіки приведені в рис.1, 2, 3.(Графіки додаються) Аналізуючи калібрувальні графіки, в залежності від концентрації реактиву Несслера, що був добавлений до м'ясо-водної витяжки калібрувальна крива в прикладі №3 при різних ступенях свіжості яловичини рівномірно зростала. Таблиця 2 Оптичні показники свіжості яловичини при різних розведеннях о третьому прикладі К-ть крапель реактиву Оптичні показники при Оптичні показники при Оптичні показники Несслера, кр. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 свіжій яловичині 2 0,349±0,460 0,360±0,117 0,458±0,072 0,491±0,097 0,631±0,144 0,716±0,059 0,818±0,060 0,857±0,158 0,902±0,118 0,990±0,084 1,224±0,056 1,344±0,094 сумнівній свіжості яловичини 3 0,328±0,065 0,529±0,036 0,574±0,053 0,719±0,023 0,756±0,041 0,911±0,058 1,025±0,123 1,082±0,016 1,296±0,160 1,537±0,140 1,597±0,138 1,754±0,107 несвіжої яловичини 4 0,404±0,022 0,476±0,052 0,571±0,057 0,658±0,069 0,743±0,094 0,953±0,089 0,980±0,085 1,177±0,121 1,500±0,177 2,413±0,277 2,697±0,407 3,037±0,302 Дані таблиці 1, 2 та рис.1, 2, 3 свідчать про те, що приклад №3 найбільш є достовірним при побудові калібрувального графіку і точним при визначені різних ступеней свіжості яловичини. Калібрувальний графік, який складається із 12 розведень показує поступове та рівномірне зростання значень оптичної щільності. Тому приклад №3 був запропонований як спосіб для побудови калібрувального графіку при визначенні ступенів свіжості яловичини з реактивом Несслера. Застосування запропонованого способу є більш достовірним в такій частоті розведень і може використовува тися для визначення ступеня свіжості яловичини в комплексі з іншими методами. Джерела інформації 1. Антипова Л.В., Глотова И.А., Рогов И.А. Определение общего содержания пигметов в мясе// Методы исследования мяса и мясных продуктов. - М.: Колос, 2001. - 376с. 2. 1. Ан типова Л.В., Глотова И.А., Ро гов И.А. Определение массовой доли белка в мясе биуретовым методом// Методы исследования мяса и мясных продуктов. - М.: Колос, 2001. -376с.