Штами saccharomyces cerevisiae, придатні для виробляння пекарських дріжджів, що є осмостійкими та стійкими до дії слабких органічних кислот, способи їх одержання та застосування

Реферат: Винахід належить до гібридних штамів Saccharomyces cerevisiae, а саме штаму Saccharomyces cerevisiae CNCM І-4312 та штаму Saccharomyces cerevisiae CNCM І-4313, які одержані шляхом схрещування штамів Saccharomyces cerevisiae CNCM І-4341 та Saccharomyces cerevisiae CNCM І-4448. Також винахід належить до штамів Saccharomyces cerevisiae, а саме штаму Saccharomyces cerevisiae CNCM І-4409 та штаму Saccharomyces cerevisiae CNCM І-4410, які одержані шляхом мутагенезу штаму Saccharomyces cerevisiae CNCM І-4341. Всі заявлені штами Saccharomyces cerevisiae призначені для використання як пекарські дріжджі, де дріжджі проявляють осмостійкість та стійкість до слабких органічних кислот. Крім того, винахід належить до способу одержання заявлених штамів Saccharomyces cerevisiae. Також винахід належить до пекарських дріжджів, які містять отримані штами, тіста на цих дріжджах, способу отримання хлібного продукту з цього тіста. UA 111839 C2 (12) UA 111839 C2 UA 111839 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Первинна заявка У цій заявці заявлено пріоритет Французької заявки номер FR 1151354, поданої 18 лютого 2011 p., вміст якої включено шляхом посилання. Галузь винаходу Даний винахід відноситься до галузі штамів Saccharomyces cerevisiae, здатних продукувати пекарські дріжджі, до способів їх одержання, до пекарських дріжджів, одержаних з цих дріжджів, до хлібопекарського тіста, що їх містить, а також до хлібопекарських способів та хлібних продуктів, які можуть бути одержані з використанням цього тіста. Більш конкретно, даний винахід відноситься, у найбільш загальному аспекті, до "промислових" штамів Saccharomyces cerevisiae, здатних продукувати пекарські дріжджі, що є осмостійкими та що проявляють характеристичну стійкість до дії слабких органічних кислот. Рівень техніки Документ WO 96/38538 описує дріжджі, одержані з покращених штамів S. cerevisiae, що проявляють підвищену осмостійкість у тому, що надають гази, що відходять, (продукування СО2) корисні у тісті для хліба, що містить високі концентрації цукру від 16 % до 25 % (пекарські відсотки). У цьому документі відсутній опис властивостей цих дріжджів у присутності фунгіцидів, таких як слабкі органічні кислоти. Документ US 4 318 991 описує спосіб одержання пекарських дріжджів, які мають високу ферментативну активність у пекарському тісті навіть у присутності фунгіцидів, таких як слабкі органічні кислоти, наприклад оцтова кислота або пропіонова кислота. Цей спосіб включає стадію додавання такої кислоти, зокрема протягом розмноження дріжджів, на кінцевій стадії цього розмноження таким чином, щоб "адаптувати" дріжджі до цієї кислоти, зокрема, присутньої у формі пропіонату кальцію (у цій заявці позначеного Calpro або додатково срр) у пекарському тісті. Цей документ не описує властивості дріжджів, одержаних таким чином, у тісті з високим вмістом цукру. А документ, поданий Заявником, US 4 346115, описує спосіб одержання пекарських дріжджів, виконаних стійкими до дії слабких органічних кислот, з осмостійкого штаму, безперервним додаванням меляси протягом кінцевого циклу їх розмноження. Інший документ, також поданий Заявником, ЕР 1559322, описує штами для одержання, після адаптації до слабких кислот, дріжджів, які навіть більш ефективні, відповідно до тіста, добре відомого фахівцям у цій галузі, та контрольного штаму, що був стандартом протягом більш ніж двадцяти років для одержання комерційних дріжджів, ефективних у солодкому тісті у присутності фунгіцидів. Додатково до того факту, що адаптація, зазначена вище, до слабких кислот, у формі пропіонату кальцію, наприклад, протягом розмноження дріжджів, має певну вартість, останнє може також мати негативний вплив на ферментативну активність дріжджів, зокрема у присутності солодкого або дуже солодкого тіста. Несприятливим загальним моментом у цих методах рівня техніки, направлених на покрашення резистентності пекарських дріжджів до слабких кислот, що захищають від плісняви, у солодкому та не солодкому пекарському тісті, шляхом адаптації штамів, з яких вони були одержані, до зазначених слабких кислот, є те, що вони надають дріжджам тільки тимчасову/нестабільну та не постійну стійкість до слабких кислот. Адаптація полягає у піддаванні дріжджових клітин дії сублетальної кількості слабких кислот протягом їх фази росту; таке попереднє піддавання дії потім дозволяє адаптованим клітинам бути стійкими у присутності тієї ж самої слабкої кислоти краще, ніж коли їх поміщають в умови ферментації. У певних випадках, дана слабка кислота може надавати адаптацію по відношенню до наступної присутності іншої слабкої кислоти на ферментативній фазі. Ці представленні проілюстровані у статті Ferreira et al. (1997) International Journal of Food Microbiology 36, 145-153. Механізми адаптації до слабких кислот були предметом декількох досліджень. Деякі з цих досліджень були поєднані в оглядовій статті Piper et al. (2001) Microbiology 147, 2635-2642. У ній описано, що адаптація заснована на клітинному механізмі, що включає декілька білків, включаючи певні мембранні насоси. Ці механізми не генетичні та суттєво тимчасові: вони встановлюються клітинами як реакція на стрес, представлений слабкою кислотою, але закінчуються зникненням за відсутності такого стресу: попередньо адаптовані клітини повертаються у неадаптований стан клітин. Інші, більш складні процеси, наприклад, описані у документах ЕР 645094 або WO 99/51746, описують генетичну модифікацію штамів, здатних до продукування пекарських дріжджів таким чином, щоб робити їх характеристично стійкими до дії слабких кислот. Заявник, продовжуючи дослідження штамів, що є все ще більш ефективними, відкрив, що конкретний штам, одержаний з його внутрішньої колекції осмостійких штамів, має генетичну 1 UA 111839 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 спадковість таким чином, ніби він гібридизований або мутований, відповідно до умовних процесів додатково, це забезпечує штам, здатний продукувати пекарські дріжджі, особливо ефективні та які, цілком несподівано, не потребують будь-якої адаптації перед введенням у дуже солодке тісто, що містить слабку кислоту у формі пропіонату кальцію (що має назву Calpro, або срр), наприклад. Це відкриття являє собою основу даного винаходу. Стислий опис об'єктів даного винаходу Таким чином, у найбільш загальному аспекті, даний винахід відноситься до способу одержання штаму S. cerevisiae, здатного продукувати пекарські дріжджі, які проявляють осмостійкість та характеристичну стійкість до слабких органічних кислот, з промислового штаму S. cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 р. у CNCM (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes [Французька національна колекція культур мікроорганізмів], Institut Curie, 25 rue du docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15) під номером I-4341, або з промислового штаму, родинного до нього, через Ту його профіль та/або через картування локусу полігенних ознак (QTL картування). Як відомо Заявнику, це перший раз, коли описано спосіб одержання пекарських дріжджів, що надає зазначеним дріжджам як осмостійкість, так і характеристичну стійкість до слабких кислот при розподілі за допомогою витратних та/або складних процесів, відомих з рівня техніки. У першому варіанті способу за даним винаходом, спосіб одержання включає стадію гібридизації зазначеного промислового штаму та щонайменше одну стадію вибору одержаного гібриду, вибраного з групи, що складається з: (і) ферментативної активності, виміряної за допомогою Burrows and Harrison ферментометра у щонайменше тесті А5' або тестах А5 та А5', вибраний гібрид є таким, що вивільнення його газу складає щонайменше 10 %, переважно щонайменше 15 % - 25 %, більш ніж вивільнення контрольного штаму що складається з S. cerevisiae штаму, депонованого 8 липня 2010 р. у CNCM [Французька національна колекція культур мікроорганізмів] під номером I-4341; (іі) час перевірки у схемі одержання тіста безперервним способом для тіста, що містить 18 % цукру (пекарські відсотки) у присутності 0,4 % пропіонату кальцію, вибрані гібриди здатні продукувати пекарські дріжджі шляхом розмноження, за відсутності адаптації до пропіонату кальцію, що надає час перевірки від 85 % до 105 % та переважно від 95 % до 105 % час перевірки наданого контрольними пекарськими дріжджами, продукованими з промислового штаму S. cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 р. у CNCM [Французька національна колекція культур мікроорганізмів] під номером I-4341 розмноженням з адаптацією до присутності пропіонату кальцію зазначеного штаму; (ііі) час перевірки у схемі одержання тіста безперервним способом для тіста, що містить 23 % цукру (пекарські відсотки) у присутності 0,4 % пропіонату кальцію, відібрані гібриди, здатні продукувати пекарські дріжджі розмноженням, за відсутності адаптації до пропіонату кальцію, що надає час перевірки від 85 % до 105 % та переважно від 95 % до 105 % часу стійкості до впливу наданого контрольними пекарськими дріжджами, продукованими з промислового штаму S. cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 р. у CNCM [Французька національна колекція культур мікроорганізмів] під номером I-4341 розмноженням з адаптацією до присутності пропіонату кальцію зазначеного штаму; (iv) час перевірки у схемі одержання тіста безперервним способом для тіста, що містить 25 % цукру (пекарські відсотки), відібрані гібриди здатні продукувати пекарські дріжджі розмноженням, за відсутності адаптації до пропіонату кальцію, що надає час перевірки від 85 % д 105 % та переважно від 95 % до 105 % часу стійкості до впливу, наданого контрольними пекарськими дріжджами, продукованими з промислового штаму S. cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 р. у CNCM [Французька національна колекція культур мікроорганізмів] під номером I-4341 розмноженням з адаптацією до присутності пропіонату кальцію зазначеного штаму. Даний винахід також відноситься до таких гібридів, одержаних зі штаму I-4341: - Saccharomyces cerevisiae штаму, депонованого 11 травня 2010 р. у CNCM [Французька національна колекція культур мікроорганізмів] під номером I-4312 та - Saccharomyces cerevisiae штаму, депонованого 11 травня 2010 р. у CNCM [Французька національна колекція культур мікроорганізмів] під номером I-4313. Відповідно до другого варіанту способу за даним винаходом, спосіб включає стадію мутагенезу промислового штаму S. cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 р. у CNCM [Французька національна колекція культур мікроорганізмів] під номером I-4341, або його родинного штаму через Ту його профіль та/або через картування локусу полігенних ознак (QTL картування) та щонайменше одну стадію вибору одержаного мутанта, вибраного з групи, що складається з: 2 UA 111839 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 (і) ферментативної активності, виміряної за допомогою Burrows and Harrison ферментометра у тесті А5'; вибраний мутант є таким, що вивільнення його газу складає щонайменше на 5 % 20 % більш ніж вивільнення контрольного штаму що складається з промислового штаму S. cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 р. у CNCM [Французька національна колекція культур мікроорганізмів] під номером I-4341; (іі) час перевірки у схемі одержання тіста безперервним способом для тіста що містить 15 % цукру (пекарські відсотки) у присутності 0,4 % пропіонату кальцію, вибраний мутант здатні продукувати пекарські дріжджі розмноженням, за відсутності адаптації до пропіонату кальцію, що надає час перевірки від 95 % до 105 % часу стійкості до впливу наданого контрольними пекарськими дріжджами, продукованими з промислового штаму S. cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 р. у CNCM [Французька національна колекція культур мікроорганізмів] під номером I-4341 розмноженням з адаптацією до присутності пропіонату кальцію зазначеного штаму; (ііі) час перевірки у схемі одержання тіста безперервним способом для тіста що містить 18 % цукру (пекарські відсотки) у присутності 0,4 % пропіонату кальцію, вибраний мутант здатні продукувати пекарські дріжджі розмноженням, за відсутності адаптації до пропіонату кальцію, що надає час перевірки від 90 % до 105 % часу стійкості до впливу наданого контрольними пекарськими дріжджами, продукованими з промислового штаму S. cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 р. у CNCM [Французька національна колекція культур мікроорганізмів] під номером I-4341 розмноженням з адаптацією до присутності пропіонату кальцію зазначеного штаму; (iv) час перевірки у схемі одержання тіста безперервним способом для тіста що містить 23 % цукру (пекарські відсотки) у присутності 0,4 % пропіонату кальцію, вибраний мутант здатні продукувати пекарські дріжджі розмноженням, за відсутності адаптації до пропіонату кальцію, що надає час перевірки від 90 % до 105 % часу стійкості до впливу наданого контрольними пекарськими дріжджами, продукованими з промислового штаму S. cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 р. у CNCM [Французька національна колекція культур мікроорганізмів] під номером I-4341 розмноженням з адаптацією до присутності пропіонату кальцію зазначеного штаму. Об'єктом даного винаходу є також штами Saccharomyces cerevisiae, депоновані 8 грудня 2010 р. у CNCM [Французька національна колекція культур мікроорганізмів] під номерами I-4409 та I-4410. Об'єктом даного винаходу є також пекарські дріжджі, що можуть бути одержані розмноженням, без адаптації до присутності слабкої кислоти (слабких кислот), штаму за даним винаходом, або одержані способом за даним винаходом. Заявником було знайдено, що, якщо зазначені пекарські дріжджі продуковані з адаптацією, то корисний ефект у термінах зменшення часу стійкості до впливу підсилюється. Крім того, об'єктами даного винаходу є: - хлібопекарське тісто, що містить пекарські дріжджі, як заявлено у даному винаході; - згадане хлібопекарське тісто переважно вибирають з тіста, в якому ферментацію проводять як у присутності осмотичного тиску, завдяки присутності щонайменше 15 % цукру, переважно щонайменше 18 % цукру, більш переважно щонайменше 23 % цукру та ще більш переважно щонайменше 25 % цукру (пекарські відсотки) та у присутності фунгіциду - слабкої органічної кислоти типу, переважно у формі пропіонату кальцію. Об'єктом даного винаходу є також спосіб одержання спіченого хлібного продукту із застосуванням зазначеного хлібопекарського тіста. Об'єктом даного винаходу є також хлібний продукт, який може бути одержаний за допомогою зазначеного способу одержання. Інші характеристики та переваги будуть більш детально описані за допомогою ілюстративних втілень даного винаходу, що наведені тільки для ілюстрації та є необмежуючими. Детальний опис даного винаходу У даному винаході, термін "осмостійкими пекарські дріжджі" призначений для позначення дріжджів, що мають щонайменше одну з таких властивостей: - інвертазну активність менш ніж 35 одиниць, переважно менш ніж 30 та навіть більш переважно менш ніж 20, інвертазні одиниці визначають як продукування одного мікромолю відновлюючих цукрів за 5 хв на мг сухої речовини дріжджів при 30 °C та рН 4,7 без плазмолізу дріжджів, а саме половини мікромолю інвертованої сукрози (тест описано у патенті US 4 318 929); - проходить щонайменше один з таких тестів за допомогою ферментометра Burrows and Harrison, описаних у "Journal of Institute of Brewing", vol. LXV, No. 1, January-February 1959, та які визначені у патенті ЕР 1559322 як А5, А5', А6 та А6'; 3 UA 111839 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 - проходить щонайменше один з таких хлібопекарських тестів порівняно з адаптованим штамом I-4341 та завжди у присутності, у пекарському тісті, 0,4 % пропіонату кальцію та вищого вмісту цукру, зазначений тест має назву, у даному винаході, NT15 %+, NT18 %+, NT23 %+, NT25 %+: вони відповідають вимірюванням часу стійкості до впливу у схемах "тіста, одержаного безперервним процесом", а саме безпосередніми способами, в яких фактично немає першої ферментації між інтенсивним замісом та розділенням тіста, одержані шматки тіста ферментують у формах при 35 °C - 40 °C. Наступна ферментація, що є істотною ферментацією у такому способі, має назву "перевірка". Час перевірки визначають як час, необхідний для того, щоб хлібопекарське тісто досягло заданої висоти у формі, що відповідає бажаному збільшенню обсягу тіста для того, щоб помістити його у піч. Переважно, осмостійкі дріжджі за даним винаходом мають щонайменше дві властивості, як визначеної у зазначених вище тестах. У даному винаході, вираз "характеристична стійкість дріжджів до слабких органічних кислот, що присутні, наприклад, у формі пропіонату кальцію, " призначений для позначення стійкості, що ані індукована, наприклад, шляхом адаптації, ані одержана після генетичної модифікації зазначених дріжджів, іншої ніж гібридизація або мутація штаму, з якого вони одержані, як описано нижче. У даному винаході, термін "промисловий штам" призначений для позначення штаму, який на відміну від "лабораторних" штамів, не обов'язково гаплоїдний або диплоїдний, але плоїдність якого частіше є більш складною. У даному винаході, термін "Ту профіль" штаму призначений для позначення будь-якого профілю, одержаного ПЦР з використанням праймерів, направлених на послідовності-мішені, що відповідають генетичним "перегородкам" що виникають у результаті рухів транспозонів (Ту). Приблизно 100 копій таких послідовностей присутні у геномі Saccharomyces cerevisiae, більш конкретно у послідовностях близько до генів, що кодують тРНК. Кількість та розподіл генома у Ту елементі змінюється залежно від штаму та надає можливість демонструвати значний поліморфізм між штамами. Цей метод описаний у стандарті DIN CEN/TS 15790 березень 2009) для ідентифікації пробіотичних дріжджів для корму тварин. У даному винаході, вираз "картування локусу полігенних ознак (QTL картування)" призначений для позначення методу, що полягає у конструюванні генетичних карт, що надає можливість локалізувати локуси (ділянки хромосоми), задіяні у варіації полігенних ознак, пов'язані з локусами, що більш легко ідентифікуються, маркерами. У контексті даного винаходу, всі відсотки, зазначені у тестах відбору, якщо не зазначено інше, надані як "пекарські" відсотки, добре відомі фахівцям у цій галузі; ці відсотки являють собою відсотки за масою присутніх інгредієнтів (наприклад, цукрів, пропіонату кальцію, тощо) по відношенню до маси борошна, що являє собою 100 %. Приклади Приклад 1: Одержання гібридів Гібридні штами I-4312 та I-4313, що є об'єктами даного винаходу, продукуються систематичним схрещуванням один з одним штамів з внутрішньої колекції Заявника, вибраними як осмостійкі та/або осморезистентні, та не дуже чутливі до присутності слабких органічних кислот або їх солей, застосованих як фунгіциди, наприклад, депонованих у Collection Nationale de Culture de Microorganismes [Французька національна колекція культур мікроорганізмів] Institut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15, France, 8 липня 2010 p. під номером I4341 та 9 лютого 2011 p. під номером I-4448. Програму гібридизації проводили відповідно до звичайних методів, наприклад, описаних у "Techniques and Protocols" chapters 21 to 23 керівництва "Methods in Yeast Genetics, A Cold Spring Harbor Laboratory Course Manual, 2000 Edition" by D. Burke, D. Dawson and T. Stearns, Cold Spring Harbor Laboratory Press (ISBN 0-87969-588-9). Приклад 2: Одержання дріжджів згідно з винаходом з гібридів прикладу 1 Для одержання пекарських дріжджів за даним винаходом, гібридні штами, одержані у прикладі 1, поміщали у культуру у колбах або у ферментаторах у середовища, які відомі, але не містять слабкої кислоти. У колбах, можна застосовувати культуральне середовище YPD, як описано у додатку А, присвяченому культуральним середовищам, посібника "Methods in Yeast Genetics, A Cold Spring Harbor Laboratory Course Manual, 2000 Edition" by D. Burke, D. Dawson and T. Stearns, Cold Spring Harbor Laboratory Press (ISBN 0-87969-588-9). У ферментаторах, звичайно, культуральні умови є такими, що метаболізм дріжджового штаму є істотно респіраторним, та/або таким що етанол істотно не продукується. 4 UA 111839 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Термін "істотно" означає, що такі умови підтверджені протягом усього періоду культивування, але можливо, що, час від часу, ці умови не підтверджуються у режимі періодичного підживлення, наприклад протягом перших годин культивування, що еквівалентно тривалості 1/4-1/3 періоду культивування, та зокрема першим 5 годинам культивування у режимі періодичного підживлення. Вираз "метаболізм дріжджового штаму істотно респіраторний" означає, що вуглець окислюється, а не ферментується, протягом усього періоду культивування, можливе випадкове ферментування частини вуглецю. Вираз "етанол істотно не продукується" означає, що концентрація етанолу наприкінці культивування становить менш ніж 1 %, переважно менш ніж 0,1 %, більш переважно менш ніж 0,01 % та більш переважно менш ніж 0,001 %. Фахівці у цій галузі знають, як регулювати параметри культивування даного штаму дріжджів таким чином, що умови культивування є такими, що метаболізм зазначеного штаму є істотно респіраторним, та/або таким що етанол істотно не продукується. Дріжджовий штам за даним винаходом розміщають у присутності культурального середовища за аеробних умов. Переважно, дріжджовий штам за даним винаходом розміщають у присутності культурального середовища у ферментаторі, придатному для продукування дріжджів. Об'єм ферментатора може дорівнювати об'єму від декількох мілілітрів до декількох кубічних метрів. Ферментатор також далі має назву реактора. Ферментатор переважно придатний для культивування за аеробних умов. Дріжджовий штам переважно розміщують у присутності культурального середовища у контексті культивування у режимі періодичного підживлення та/або у безперервному режимі. Вираз "культивування у режимі періодичного підживлення" або "культивування періодичного підживлення" або "режим періодичного підживлення" у цій заявці означає культивування у ферментаторі, в який поступово подають культуральне середовище, але з якого не відводять жодного об'єму середовища. У такому процесі, культуральний об'єм варіюється (та зростає) у ферментаторі. Швидкість потоку підживлення у режимі періодичного підживлення є постійною або змінною. Прикладом культивування у режимі періодичного підживлення є культивування, проведене за умов, описаних у довіднику "Yeast Technology", 2nd edition, 1991, G. Reed and T. W. Nagodawithana, опублікованому Van Nostrand Reinhold, ISBN 0-442-31892-8. Культуральне середовище містить як складові суміш цукру та інших елементів, потрібних для росту дріжджів. Інші елементи, потрібні для росту дріжджів є такими: щонайменше одне джерело азоту, щонайменше одне джерело сірки, щонайменше одне джерело фосфору, щонайменше одне джерело вітамінів та/або щонайменше одне джерело мінералів. Ці інші елементи забезпечені у достатніх кількостях таким чином, щоб вони не були фактором, що обмежує ріст дріжджів. Джерело азоту, наприклад, забезпечено у формі сульфату амонію, гідроксиду амонію, діамоній фосфату, аміаку, сечовини та/або їх комбінації. Джерело сірки, наприклад, забезпечено у формі сульфату амонію, сульфату магнію, сірчаної кислоти та/або їх комбінації. Джерело фосфору, наприклад, забезпечено у формі ортофосфорної кислоти, фосфату калію, діамоній фосфату, моноамоній фосфату та/або їх комбінації. Джерело вітамінів, наприклад, забезпечено у формі меляси, дріжджового гідролізату, розчину чистих вітамінів або суміші чистих вітамінів, та/або їх комбінації. Джерело вітамінів забезпечує дріжджі усіма вітамінами у кількостях, які щонайменше еквівалентні рекомендованим у довідниках. Декілька джерел вітамінів можуть бути скомбіновані. Джерело мінералів, наприклад, забезпечено у формі меляси, суміші мінеральних солей та/або їх комбінації. Джерело мінералів забезпечує дріжджі усіма макроелементами та мікроелементами в кількостях щонайменше еквівалентних рекомендованим у довідниках. Декілька джерел мінералів можуть бути скомбіновані. Та ж сама речовина може забезпечувати декілька різних елементів. Умови для продукування у ферментаторі пекарських дріжджів детально пояснені у A. Loiez in the chapter "Production of baker's yeasts by biotechnology" of the Techniques de I'lngenieur [Techniques for the Engineer], Reference J6013 ° of March 10, 2003. 5 UA 111839 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Таке саме культуральне середовище гібридів за даним винаходом використовують для реперного штаму I-4341, з яким вони будуть порівняні, але при проведенні, щодо зазначеного реперного штаму, додаткової стадії "адаптації" відповідно до методу, описаного у патентах US 4 318 991 або US4 346 115 або відповідного до поєднаної доктрини, описаної у цих двох документах. Спосіб одержання пекарських дріжджів включає щонайменше перші дві стадії з набору таких стадій, що складаються з: - розмноження чистого штаму за напіваеробних, а потім аеробних умов, - відділення центрифугуванням, продукованих таким чином дріжджів від їх культурального середовища таким чином, щоб забезпечити рідкі "кремоподібні дріжджі", що містять від 14 % до 25 % сухої речовини, або більше якщо кремоподібні дріжджі змішують з осмотичними продуктами, - фільтрування рідких кремоподібних дріжджів, одержаних таким чином, переважно на обертальному фільтрі під вакуумом, та забезпечення де гідратованих свіжих дріжджів, що містять від 26 % до 35 % сухої речовини, - змішування зазначених одержаних таким чином дріжджів, навіть у формі свіжих дріжджових брусків, або у формі подрібнених свіжих дріжджів, що містять приблизно 30 % сухої речовини, або додатково у формі частинок, переважно гранул, якщо дріжджі призначені для висушування, - висушування, у щадному режимі, у потоці гарячого повітря, наприклад, псевдозрідженням частинок дріжджів, одержаних екструзією, - упаковки перед маркетингом. Приклад 3: Порівняння ефективності неадаптованих дріжджів згідно з винаходом з адаптованим контрольним штамом Приклад 3.1: Представлення тестів 3.1.1. Тести з використанням ферментометра Тести проводять з використанням ферментометра Burrows and Harrison, описаного у "Journal of Institute of Brewing", vol. LXV, No. 1, January-February 1959, та визначають таким чином: Тест А5 Суспензію дріжджів одержують таким чином: 1. 200 мг сухої речовини дріжджів для тестування 2. 5 мл розчину, що містить 108 г/л NaCI та 16 г/л (NH4)2SO4 3. Доводять об'єм до 20 мл дистильованою водою. 15 мл зазначеної вище суспензії (тобто 150 мг сухої речовини дріжджів) врівноважують при температурі 30 °C протягом 15 хвилин. Суміш 20 г борошна та 4 г сахарози врівноважують перед цим протягом ночі при 30 °C та додають до цієї суспензії. Всю суміш гомогенізують протягом періоду 35 секунд. Сформоване тісто інкубують у герметично закритому контейнері, при 30 °C. Вивільнення газу (виражене у мл при 760 рт.ст.) реєструють за весь 120-хвилинний період (цей період може бути відрегульований). Тест А5' Протокол ідентичний до А5 за винятком того, що: 1. 500 мкл розчину 16 % (мас./об.) пропіонату кальцію (calpro) додають у верхню частину суміші борошно + цукор безпосередньо перед фазою 35-секундного змішування. Тест А5" Протокол ідентичний до А5 за винятком того, що: 1. 1 мл розчину при 16 % (мас/об.) пропіонату кальцію додають у верхню частину суміші борошно + цукор безпосередньо перед фазою 35-секундного змішування. Тест А6 Протокол ідентичний до PS4g за винятком того, що: 1. Дріжджову суспензію одержують з 400 мг сухої речовини (замість 200 мг), що призводить до одержання 300 мг сухої речовини дріжджів, яку використовують у тесті. 2. Суміш борошно + цукор складається з 25 г борошна (замість 20 г) та 6,5 г сахарози (замість 4 г). Тести А51 та А51' (з пропіонатом кальцію) Для свіжих дріжджів Дріжджову суспензію одержують таким чином: 1. 400 мг сухої речовини дріжджів для тестування. 2. Змішують з об'ємом дистильованої води, потрібним для одержання загального об'єму води 6,8 мл, з урахуванням води, забезпеченої свіжими дріжджами (типово 70 % маси пресованих дріжджів). 6 UA 111839 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 3. Врівноважують при 30 °C протягом 22 хвилин. 4. Додають 4,5 мл розчину, що містить 73,6 г/кг NaCI та гомогенізують. 20 г борошна та 3 г сахарози додають до зазначеної вище суспензії. Це все змішують протягом періоду 35 секунд. Вивільнення газу (виражене у мл при 760 мм рт.ст.) реєструють за весь 120-хвилинний період (період може бути відрегульований). Вимірювання розпочинається через 36 хвилин після початку протоколу. Цей протокол наявний як варіант, що включає присутність пропіонату кальцію. У цьому випадку, настадії 4 одержання дріжджової суспензії, розчин, що містить 73,6 г/кг NaCI, також містить 17,4 г/кг пропіонату кальцію. Для сухих дріжджів Змішують 20 г борошна, 3 г сахарози та 400 мг сухої речовини дріжджів для тестування. Врівноважують при 30 °C протягом 12 хвилин. Додають 6,8 мл дистильованої води та 4,5 мл розчину, що містить 73,6 г/кг NaCI та гомогенізують протягом 35 секунд. Через 36 хвилин після додавання дистильованої води, проводять другу гомогенізацію, ідентичну першій. Вивільнення газу (виражене у мл при 760 мм рт.ст.) реєструють за весь 120-хвилинний період (період може бути відрегульований). Вимірювання розпочинається через 60 хвилин після початку протоколу. Тести А61 та А61' (з пропіонатом кальцію) Для свіжих дріжджів Дріжджову суспензію одержують таким чином: 1. 700 мг сухої речовини дріжджів для тестування. 2. Змішують з об'ємом дистильованої води, потрібним для одержання загального об'єму води 7,5 мл, з урахуванням води, забезпеченої свіжими дріжджами (типово 70 % маси пресованих дріжджів) 3. Врівноважують при 30 °C протягом 22 хвилин 4. Додають 5,75 мл розчину, що містить 73,6 г/кг NaCI та гомогенізують. 25 г борошна та 6,5 г сахарози додають до зазначеної вище суспензії. Це все змішують протягом періоду 35 секунд. Вивільнення газу (виражене у мл при 760 мм рт.ст.) реєструють за весь 120-хвилинний період (період може бути відрегульований). Вимірювання розпочинається через 36 хвилин після початку протоколу. Цей протокол наявний як варіант, що включає присутність пропіонату кальцію. У цьому випадку, на стадії 4 одержання дріжджової суспензії, розчин, що містить 73,6 г/кг NaCI, також містить 17,4 г/кг пропіонату кальцію Для сухих дріжджів Змішують 25 грамів борошна, 6,5 г сахарози та 700 мг сухої речовини дріжджів для тестування. Врівноважують при 30 °C протягом 12 хвилин. Додають 7,5 мл дистильованої води та 5,75 мл розчину, що містить 73,6 г/кг NaCI та гомогенізують протягом 35 секунд. Через 36 хвилин після додавання дистильованої води, проводять другу гомогенізацію, ідентичну першій. Вивільнення газу (виражене у мл при 760 мм рт.ст.) реєструють за весь 120-хвилинний період (період може бути відрегульований). Вимірювання розпочинається через 60 хвилин після початку протоколу. 3.1.2. Хлібопекарські тести, 4 рецепти проаналізовано: - рецепт РТ1 що містить 15 % за масою (пекарський відсоток) сахарози та 0,4 % за масою (пекарський відсоток) пропіонату кальцію; - рецепт РТ2 що містить 18 % за масою (пекарський відсоток) сахарози та 0,4 % за масою (пекарський відсоток) пропіонату кальцію; - рецепт РТЗ що містить 23 % за масою (пекарський відсоток) сахарози та 0,4 % за масою (пекарський відсоток) пропіонату кальцію; - рецепт РТ4 що містить 25 % за масою (пекарський відсоток) сахарози та 0,4 % за масою (пекарський відсоток) пропіонату кальцію. У тестах 1-4, різницю у часі перевірки між, з одного боку, сухими дріжджами, одержаними зі штаму для оцінювання та, з іншого боку, сухими дріжджами, одержаними з контрольного штаму "С" вимірюють у даному хлібопекарському процесі та за даними рецептами. Ефективність 7 UA 111839 C2 5 вимірюють як різницю у відсотках між тестовим штамом та контрольним штамом. Негативна різниця відповідає більшій ефективності, ніж у контрольного штаму. Рецепти, застосовані у тестах та виражені у пекарських відсотках надані у таблиці, наведеній нижче. Ця таблиця також включає детальну інформацію про різні використані протоколи. Тест Склад Борошно Вода сукроза Сіль Сухі дріжджі Жир Поліпшувач смаку Молочний порошок Яйця Calpro Температури Вихідні інгредієнти + борошно + вода Тістомісильна машина з водяним кожухом Тісто Час відсутній 15 %+ РТ1 Рецепт 1 100 % 54 % 15 % 1,7 % 1,5 % 7,5 % 1% 0,4 % Рецепт 1 Рецепт 2 Рецепт 3 Рецепт 4 64 °C 70 °C 70 °C 64 °C 22,5 °C 23,5 °C 24,5 °C 22,5 °C 27 °C 28 °C 29 °C 27 °C Рецепт 3 L1+MG1 L1 Н5.5 10 хв 320 г Рецепт 4 10 хв 320 г Рецепт 2 L1+MG1 L1 Н4 15 хв 320 г 25 хв 50 хв 25 хв 25 хв 35 °C 90 % RH 21 хв. 190 °C 35 °C 90 %RH 21 хв. 190 °C Діаграма Рецепт 1 Заміс Мас Duffy L5 R5 Н4 Ферментація у потоці Розділення Закруглення - розпушення Час від початку завершення замісу - до початку формування Формувальна машина Формування US Перевірка Forma піч Випікання Reed піч 10 15 20 25 Час відсутній Час відсутній Rotimani 23 %+ 18 %+ 25 %+ РТ2 РТЗ РТ4 Рецепт 2 Рецепт 3 Рецепт 4 100 % 100 % 100 % 52 % 45 % 50 % 18 % 23 % 25 % 1% 1,5 % 1,7 % 1% 2,3 % 2% 5% 10 % 7,5 % 0,5 % 0,3 % 1% 4% 3% 6% 10 % 0,4 % 0,3 % 0,4 % L5 R5 Н4 10 хв 320 г 35 °C 35 °C 90 %RH 90 %RH 21 хв. 190 °C 21 хв. 190 °C Детальний опис процедури: Тестовий протокол, що застосовували до різних рецептів вище у тісті РТ1 - РТ4, є таким: 1. Зважте різні інгредієнти. 2. Виміряйте температуру оточуючого середовища та температуру борошна. 3. Відрегулюйте температуру води таким чином, щоб одержати температуру тіста, при +/0,5 °C, 27 °C для рецептів 1 та 4; 28 °C для рецепту 2 та 29 °C для рецепту 3. 4. Помістіть інгредієнти у чашу Мас Duffy® тістомісильну машину Hobart A200®, кожух якої термостатовано перед цим водою при 22,5 °C (рецепти 1 та 4) або 23,5 °C (рецепт 2) або 24,5 °C (рецепт 3). 5. Змішайте сухі інгредієнти при першій швидкості протягом 1 хвилини. 6. Діаграма замісу залежить від використаного рецепту: - рецепти 1 та 4: - жир включено після попереднього змішування у сухому стані - додають воду - змішування проводять протягом 5 хвилин при першій швидкості (L5) - одержаний у результаті продукт залишають відстоюватися протягом 5 хвилин (R5) 8 UA 111839 C2 5 10 15 20 25 - заміс проводять протягом 4 хвилин при другій швидкості (Н4) - рецепт 2: - воду додають після попереднього змішування у сухому стані - змішування проводять протягом 1 хвилини при першій швидкості (L1) - одержаний у результаті продукт залишають відстоюватися протягом 1 хвилини для додавання жиру (+MG1) - змішування проводять протягом 1 хвилини при першій швидкості (L1) - заміс проводять протягом 4 хвилин при другій швидкості (Н4) - рецепт 3: - воду додають після попереднього змішування у сухому стані - змішування проводять протягом 1 хвилини при першій швидкості (L1) - одержаний у результаті продукт залишають відстоюватися протягом 1 хвилини для додавання жиру (+MG1) - змішування проводять протягом 1 хвилини при першій швидкості (L1) - заміс проводять протягом 5 хвилин 30 секунд, при другій швидкості (Н5.5). 7. Перевірте температуру одержаного тіста у кінці замісу. 8. Ферментація у потоці при 23 °C протягом 10 хвилин (рецепти 1, 3 та 4) або 15 хвилин (рецепт 2) 9. Розділіть на шматки по 320 г. 10. Розпушіть та накрийте 11. Залиште відстоюватися протягом 10 хвилин (рецептні, 3 та 4) або 30 хвилин (рецепт 2). 12. Сформуйте тісто. 13. Помістить шматки тіста по 320 г на лотку (розміри: основа лотка 185  75 мм; верхня частина лотка 200  90 мм; висота лотка 75 мм). 14. Визначте час перевірки, в інкубаторі Stericult® при 35 °C та 90 % відносної вологості. Час перевірки являє собою час, що минає між розміщенням лотків в інкубаторі та рухом, при якому тісто досягає висоти 85 мм у противні. 15. Випікайте у колисковій печі Reed® протягом 21 хвилин при 190 °C. Приклад 3.2: Результати 30 Таблиця 1: Тести ферментометра: різниця між гібридом за даним винаходом та I-4341 батьківським штамом Біомаса, одержана у колбі, оцінювання свіжих дріжджів Тест А5 А5' Приріст/батьки Батьківський Батьківський штам штам 1 I-4341 без 2 I-4448 без адаптації адаптації 122 120 92 98 I-4312 без адаптації I-4313 без адаптації 137 114 17 & 24 % 132 115 18 & 24 % Біомаса, одержана у 7-літровому ферментаторі, оцінювання свіжих дріжджів Тест А5 А5' А61 А61' 35 I-4341 без адаптації 96 79 139 88 I-4341 з адаптацією 99 108 179 105 I-4312 без адаптації 121 114 209 121 I-4313 без адаптації 126 107 225 131 Біомаса, одержана у 20-літровому ферментаторі, оцінювання на сухих дріжджах Тест А5 А5' А51 I-4341 без адаптації 102 99 159 I-4341 з адаптацією 105 107 214 9 I-4312 без адаптації 105 90 173 I-4313 без адаптації 97 80 209 UA 111839 C2 Продовження таблиці 1 А51' А61 А61' 124 167 95 160 232 114 107 169 97 134 241 125 Таблиця 2: Тест схема тіста, одержаного безперервним способом, гібрид за даним винаходом порівняно з дріжджами, одержаними від не адаптованого штаму, депонованого 8 липня 2010 р. у CNCM [Французька національна колекція культур мікроорганізмів] під номером. I-4342. РТ1 РТ2 РТЗ Біомаса, одержана у 20-літровому ферментаторі, оцінювання на сухих дріжджах Тест I-4342 без адаптації I-4313 без адаптації Τ -14 % Τ -9 % Τ -17 % Таблиця 3: Схема тіста, одержаного безперервним способом, гібриди за даним винаходом порівняно з адаптованим контролем (= адаптований I-4341) РТ2 РТЗ РТ4 Біомаса, одержана у 20-літровому ферментаторі, оцінювання на сухих дріжджах Тест I-4341 з адаптацією I-4313 без адаптації Τ 1% Τ -5 % Τ 3% 5 10 15 20 Висновок: Неадаптовані дріжджі за даним винаходом поводяться істотно ідентично або навіть краще порівняно із адаптованими контрольними дріжджами, продукованими схрещенням найкращих осмостійких штамів, наявних у внутрішній колекції Заявника та депонованих під номером I-4341 та комерційного штаму, не дуже чутливого до слабких кислот. Ці результати є несподіваними, оскільки це було абсолютно непередбачувано, така комбінація попередньо існуючих переваг штамів двох батьків шляхом гібридизації промислових штамів, особливо при перевищенні на 15 % - 25 % значень вивільнення газу їх двох батьків. Даний винахід таким чином представляє гібриди, здатні продукувати пекарські дріжджі нижчої вартості, які у той же час зберігають ефективність у дуже солодкому пекарському тісті та у присутності фунгіцидів, таких як пропіонат кальцію. Приклад 4: Одержання I-4409 та I-4410 мутантів Штам I-4341 піддавали мутагенезу шляхом дії ультрафіолетового опромінювання. Популяцію мутантів оцінювали у тестах А5 та А5' після одержання у колбах. Штами I-4409 та I4410 спочатку відбирали з цієї популяції. Приклад 5: Одержання дріжджів від мутантів прикладу 4 (подібно до прикладу 2) Приклад 6: Порівняння ефективності з контрольними дріжджами Біомаса, одержана у колбі, оцінювання свіжих дріжджів Тест А5 А5" Приріст /1-4341 у А5" (%) 25 I-4341 без адаптації 121 88 I-4409 без адаптації 117 105 19 I-4410 без адаптації 126 96 9 Біомаса, одержана у 20-літровому ферментаторі, оцінювання на сухих дріжджах 10 UA 111839 C2 Тест А5 А5' А51 А51' Тест А5 А5' I-4341 з адаптацією 101 104 104 136 I-4409 без адаптації 101 100 114 159 Різниця (%) I-4341 з адаптацією 96 101 I-4410 без адаптації 106 97 Різниця (%) 0 -4 10 17 10 -4 Хлібопекарські результати, одержані з цими дріжджами, наведені нижче (тести РТ2 та РТЗ) 5 Тест I-4341 з адаптацією Τ Τ I-4410 без адаптації 2% 2% Тест I-4341 з адаптацією Τ Τ T I-4409 без адаптації 3% 5% -1 % РТ2 РТЗ РТ1 РТ2 РТЗ I-4410 з адаптацією -11 % -4 % ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 10 15 20 25 30 35 40 1. Штам Saccharomyces cerevisiae, одержаний за допомогою способу гібридизації, який включає стадію гібридизації промислового штаму Saccharomyces cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 р. у CNCM під номером I-4341, з штамом, депонованим 9 лютого 2011 року у CNCM під номером I-4448, або способу випадкової мутації промислового штаму Saccharomyces cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 року у CNCM під номером I-4341, при цьому зазначений штам Saccharomyces cerevisiae продукує розмноженням, за відсутності адаптації до присутності слабкої кислоти (слабких кислот), пекарські дріжджі, які проявляють осмостійкість та характеристичну стійкість до слабких органічних кислот. 2. Штам Saccharomyces cerevisiae за п. 1, де спосіб гібридизації додатково включає щонайменше одну стадію вибору одержаного гібриду, при цьому стадія вибору вибрана з групи, що складається з: i) вимірювання ферментативної активності, використовуючи ферментометр Burrows and Harrison у щонайменше одному з тестів A5' та A6', причому вибраний гібрид є таким, що вивільнення його газу складає щонайменше 10 % та переважно на від 15 до 25 % більше, ніж вивільнення контрольного штаму, що складається з штаму Saccharomyces cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 року у CNCM під номером I-4341, ii) вимірювання часу перевірки у схемі одержання тіста безперервним способом для тіста, що містить, у пекарських відсотках, 15, 18, 23 або 25 % цукру у присутності 0,4 % пропіонату кальцію, причому вибрані гібриди продукують пекарські дріжджі розмноженням, за відсутності адаптації до пропіонату кальцію, що надає час перевірки від 85 до 105 % та переважно від 95 до 105 % від часу перевірки, наданого контрольними пекарськими дріжджами, продукованими з промислового штаму Saccharomyces cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 року у CNCM під номером I-4341, розмноженням з адаптацією до присутності пропіонату кальцію зазначеного штаму. 3. Штам Saccharomyces cerevisiae за п. 2, при цьому зазначений штам депонований 11 травня 2010 року у CNCM під номером I-4312. 4. Штам Saccharomyces cerevisiae за п. 2, при цьому зазначений штам депонований 11 травня 2010 року у CNCM під номером I-4313. 5. Штам Saccharomyces cerevisiae за п. 1, де спосіб випадкової мутації включає стадію мутагенезу промислового штаму та щонайменше одну стадію вибору одержаного мутанта, при цьому стадія вибору вибрана з групи, що складається з: 11 UA 111839 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 i) вимірювання ферментативної активності, використовуючи ферментометр Burrows and Harrison у тесті A5', причому вибраний мутант є таким, що вивільнення його газу складає на від 5 до 20 % більше, ніж вивільнення контрольного штаму, що складається з штаму Saccharomyces cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 року у CNCM під номером I-4341; ii) вимірювання часу перевірки у схемі одержання тіста безперервним способом для тіста, що містить, у пекарських відсотках, 15, 18 або 23 % цукру у присутності 0,4 % пропіонату кальцію, причому вибраний мутант продукує пекарські дріжджі розмноженням, за відсутності адаптації до пропіонату кальцію, що надає час перевірки від 90 % до 105 % від часу, наданого контрольними пекарськими дріжджами, продукованими з штаму Saccharomyces cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 року у CNCM під номером I-4341, розмноженням з адаптацією до присутності пропіонату кальцію зазначеного штаму. 6. Штам Saccharomyces cerevisiae за п. 5, при цьому зазначений штам депонований у CNCM під номером I-4409. 7. Штам Saccharomyces cerevisiae за п. 5, при цьому зазначений штам депонований у CNCM під номером I-4410. 8. Пекарські дріжджі, одержані розмноженням, без адаптації до присутності слабкої кислоти (слабких кислот), штаму за будь-яким з пп. 3, 4, 6 або 7, або одержані за допомогою способу за будь-яким з пп. 1, 2 та 5. 9. Хлібопекарське тісто, що містить пекарські дріжджі за п. 8. 10. Хлібопекарське тісто за п. 9, при цьому зазначене тісто вибране з тіста, в якому ферментацію проводять як у присутності осмотичного тиску, завдяки присутності щонайменше 15 % цукру, переважно щонайменше 18 % цукру та більш переважно щонайменше 23 % цукру, так і у присутності інгібітора плісняви типу слабкої органічної кислоти, переважно у формі пропіонату кальцію, причому відсотки є пекарськими відсотками. 11. Спосіб одержання спеченого хлібного продукту шляхом використання хлібопекарського тіста за п. 10. 12. Хлібний продукт, одержаний за допомогою способу за п. 11. 13. Спосіб одержання штаму Saccharomyces cerevisiae, який продукує розмноженням, за відсутності адаптації до присутності слабкої кислоти(слабких кислот), пекарські дріжджі, які проявляють осмостійкість та характеристичну стійкість до слабких органічних кислот, при цьому зазначений спосіб включає спосіб гібридизації, який включає стадію гібридизації промислового штаму Saccharomyces cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 р. у CNCM під номером I-4341, з штамом, депонованим 9 лютого 2011 року у CNCM під номером I-4448, або спосіб випадкової мутації промислового штаму Saccharomyces cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 року у CNCM під номером I-4341. 14. Спосіб за п. 13, в якому спосіб гібридизації додатково включає щонайменше одну стадію вибору одержаного гібриду, при цьому стадія вибору вибрана з групи, що складається з: i) вимірювання ферментативної активності, використовуючи ферментометр Burrows and Harrison у щонайменше одному з тестів A5' та A6', причому вибраний гібрид є таким, що вивільнення його газу складає щонайменше 10 % та переважно на від 15 до 25 % більше, ніж вивільнення контрольного штаму, що складається з штаму Saccharomyces cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 року у CNCM під номером I 4341, ii) вимірювання часу перевірки у схемі одержання тіста безперервним способом для тіста, що містить, у пекарських відсотках, 15, 18, 23 або 25 % цукру у присутності 0,4 % пропіонату кальцію, причому вибрані гібриди продукують пекарські дріжджі розмноженням, за відсутності адаптації до пропіонату кальцію, що надає час перевірки від 85 до 105 % та переважно від 95 до 105 % від часу перевірки, наданого контрольними пекарськими дріжджами, продукованими з промислового штаму Saccharomyces cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 року у CNCM під номером I-4341, розмноженням з адаптацією до присутності пропіонату кальцію зазначеного штаму. 15. Спосіб за п. 13, в якому спосіб випадкової мутації включає стадію мутагенезу промислового штаму та щонайменше одну стадію вибору одержаного мутанта, при цьому стадія вибору вибрана з групи, що складається з: i) вимірювання ферментативної активності, використовуючи ферментометр Burrows and Harrison у тесті A5', причому вибраний мутант є таким, що вивільнення його газу складає на від 5 до 20 % більше, ніж вивільнення контрольного штаму, що складається з штаму Saccharomyces cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 року у CNCM під номером I-4341; ii) вимірювання часу перевірки у схемі одержання тіста безперервним способом для тіста, що містить, у пекарських відсотках, 15, 18 або 23 % цукру у присутності 0,4 % пропіонату кальцію, причому вибраний мутант продукує пекарські дріжджі розмноженням, за відсутності адаптації до 12 UA 111839 C2 пропіонату кальцію, що надає час перевірки від 90 до 105 % від часу, наданого контрольними пекарськими дріжджами, продукованими з штаму Saccharomyces cerevisiae, депонованого 8 липня 2010 року у CNCM під номером I-4341, розмноженням з адаптацією до присутності пропіонату кальцію зазначеного штаму. 5 Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 13